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《大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞原代培养方法的改进.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、第45卷第8期温州医科大学学报Vo1．45NO．82015年8月JournalofWenzhouMedicalUniversityAug．2015●-q棚大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞原代培养方法的改进孟立平1,2s蒋承建，赵飞1,2郭艳。，池菊芳，郭航远，(1．绍兴市人民医院浙江大学绍兴医院心内科，浙江绍兴312000；2．温州医科大学第一临床医学院，浙江温州325035；3．浙江中医药大学研究生院，浙江杭州310000)[摘要]目的：探索提高大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)原代培养效率和纯度的方法。方法：在原有组织贴块法培育大鼠原代VSMCs的
2、基础上进行改良，分离出胸主动脉后进一步分离中膜，DMEM高糖培养基中加入10pg／L-~,l、板源性生长因子B(PDGF．B)。用细胞形态学及细胞免疫荧光对VSMCs进行鉴定。结果：6d左右组织块周围有细胞爬出，12d左右可以传代。镜下见细胞呈梭形，典型“峰谷”状排列生长；免疫荧光鉴定可见大量平滑肌肌动蛋白(SMA)，比传统方法获得的细胞纯度高。结论：}3t7A．PDGF．B可以缩短大鼠VSMCs原代培养时间，提高效率；剥离中膜可以提高大鼠VSMCs原代细胞的纯度。[关键词]原代细胞；血管平滑肌细胞；组织贴块法；血小板源性生长因子B[中图分类号
3、]R331[文献标志码]BDOI：10．3969~．issn．2095．9400．2015．08．011AnimprovementinprimarycultureofratvascularsmoothmuscleceHsanditsidentificationMENG三一ing1,2．JIANGCheng]ian1．ZHA0Fei2．GUOYal,i3,CHIdufang1GUOHangyuanl．1．DepartmentofCardiol-ogy,ShaoxingPeopleHospital,ShaoxingHospitalofZh~iang
4、University,Shaoxing,312000；2．TheFirstClini—calMedicalCollege,WenzhouMedicalUniversity,Wenzhou,325035；3．ZhejinngChineseMedicalUniversity,Hangzhou,310000墨匝墨■Objective：ToexploreanewefectivewayonprimarycultureofratvascularsmoothmusclecellsfVSMCs)．whichcouldshortenthecultivatetim
5、eandenhancetheVSMCs’purity．Methods：TheprimarycultureofratVSMCswasconductedbyanewwayreformedfromthetraditionalmodifiedtissueexplanttech-nique，inwhichthemediallayerwasisolatedand10g／LPDGF—BwasaddedtothehighglucoseDMEM．TheVSMCswereidentifiedbycellmorphologyandimmunocytochemistr
6、y．Results：Aboutsixdaylater,VSMCscouldbefoundaroundsometissueblocks，andpassageoftheVSMCscanbedoneabout12dayslater．Underthephasecontrastmicroscope，theVSMCslookslikespindleandthespecific“hillandvalley’’phenomenoncouldbeseen．Immunocytochemistryshowedthattherewasalargenumberofsmo
7、othmuscleactin(SMA)andtheVSMCs’puritywasmuchhigherthanthecellsgotbytheoldway．Conclusion：AddingPDGF—BcouldshortenthecultivatetimeofprimaryVSMCsandisolationofthemediallayercouldimprovetheVSMCs’purity．墨墨衄primarycells；VSMCs；tissueexplanttechnique；PDGF-B血管成形术和支架植入术是治疗严重冠状动脉泌型表型转化
8、造成大量的细胞外基质分泌L2-4J，在粥样硬化的主要方法，术后发生血管再狭窄是心血术后再狭窄发生过程中发挥了重要的作用。体外培管医师面临的一个棘手的问
