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1、·60·华南预防医学2008年2月第34卷第1期SouthChinaJPrevMed,February2008,Vol34,No.1·检验技术·应用TLC法鉴定断肠草中钩吻碱12333黄伟雄,李汴生,范山湖,戴光伟,梁春穗【摘要】目的探讨建立薄层层析法鉴定断肠草钩吻碱的检验方法。方法样品用5%氢氧化钠浸泡、振荡、超声提取后,再用三氯甲烷萃取,经薄层色谱仪自动点样、展开。结果采用对钩吻碱有特征显色的碘化铋钾显色剂显色或在254nm荧光下观察,可鉴别样品中是否含有钩吻碱。通过薄层色谱显色试验,确定方法的检测下限为0.5μg,能满足因钩吻碱引起食物中毒的检测要求。结论该方法快速、简单、直观、准确,
2、在食物中毒快速检验过程中实用、可靠。【关键词】薄层层析法;断肠草;钩吻碱中图分类号:O658.1文献标识码:B文章编号:1671-5039(2008)01-0060-03钩吻碱(gelsemine)是一种氧化吲哚型生物碱,1.2试剂存在于马钱科植物中。如钩吻素甲分子式C20H22N2O2。1.2.1钩吻素甲标准液购自Sigma公司,准确称取钩吻碱是极强的神经毒,可直接抑制中枢神经系统,钩吻素甲1.104g,用三氯甲烷溶解定容至100mL,使呼吸中枢麻痹,导致呼吸衰竭而死亡。0.15～0.3g作为储备液;取标准储备液1mL稀释至100mL,浓钩吻碱便可使人致死,钩吻碱浸膏3.5mL为中毒致度为
3、110.4mg/L。死量。大茶药别名有断肠草、野葛、火把花、大炮叶1.2.2展开剂所用展开剂组成中各物质的体积分[1][5]等,全株有毒,含毒成份即为钩吻碱,其嫩叶毒性数比为三氯甲烷∶甲醇=90∶10尤强。广东山区清远、梅州等地近年因误服大茶药1.2.3碘化铋钾显色剂称取0.85g次硝酸铋,加中毒、死亡的事件也时有发生。目前,国内外一般采冰醋酸10mL,水40mL,溶解后加入40%碘化钾[2]用高效液相色谱法(HPLC)和气相色谱-质谱联用20mL,此显色剂应现用现配。[3]仪法分析断肠草的生物碱,但这两种方法所用仪1.2.4其他三氯甲烷、氢氧化钠、无水硫酸钠及以器价格昂贵,国内一些基层检验
4、单位不具备这个条上所用试剂均为分析纯,水为蒸馏水.件。1.2.5大茶药样品来自广东梅州、韶关、连州和英薄层层析法简称TLC法,具有设备简单、成本德4个地方。[4]低、快速,分析结果直观等优点,因此我们尝试用1.3样品前处理TLC法对断肠草的钩吻碱进行检验分析,探讨解决1.3.1固体称取1.0～5.0g样品,加入5%氢氧化基层检验单位对大茶药快速定性检验的方法。钠溶液40mL,用振荡器振荡提取5min,超声提取15min,吸取20mL提取液于125mL分液漏斗中,1材料和方法加入50mL三氯甲烷振荡提取,待分层后,再用50mL三氯甲烷提取水相,合并二次提取液,经装有约20g1.1仪器和设备无水
5、硫酸钠的玻璃漏斗脱水滤入蒸发皿中,再以CAMAG公司薄层色谱仪:自动点样ATS4;自40mL三氯甲烷分数次洗涤容器和无水硫酸钠,洗动展开仪AMD2;扫描仪Scanner3;摄影仪Re-涤液并入蒸发皿中,在60℃水浴中浓缩至近干,用porstar3;20cm×20cm荧光254nm硅胶预制玻璃三氯甲烷定容至2mL,待测。同法制备阴性对照液。板;常压烘箱。1.3.2液体吸取10～20mL样品,加入5%氢氧化钠溶液40mL,余下操作同。基金项目:广东省医学科研指令性课题(C2005007)1.4洗板作者单位:1.广东省疾病预防控制中心,华南理工大学食品与轻工学院工程硕士在职研究生,广东广州5103
6、00;2.华南理工大学食将荧光254nm硅胶预制玻璃板置于装有异丙品与轻工学院;3.广东省疾病预防控制中心醇的层析缸中,待溶液在层析板上完全展开后,于室华南预防医学2008年2月第34卷第1期SouthChinaJPrevMed,February2008,Vol34,No.1·61·温下风干,在110℃烘箱中活化1h,置于干燥器中2.5检测限量试验放冷,待用。取与大茶药相似但不含钩吻素的茶叶1.0g,加1.5点样入不同含量的钩吻素甲标准,按本方法实验部分进在层析板距下端8.0mm处点样,设带宽8.0mm,行样品处理、点样、展开、显色后得薄层色谱图,见图带距30mm,样品和标准点样量为10μL
7、。1。从图中可见,0.4μg与0.6μg之间薄层展开显色后1.6展开斑点清晰,所以,本方法确定检测下限为0.5μg。把点样后的薄层板置于展开仪中,展开剂按三氯甲烷∶甲醇=90∶10设置,展距90mm,展开后N2干燥10min。样品空白0.2μg0.4μg0.6μg0.8μg1.0μg1.7显色图1钩吻碱检测限量试验将显色剂均匀地喷雾在薄层板上,若样品中含有钩吻碱,待薄层板干后,可看到对钩吻碱有特征显2.6薄层
