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《单增李斯特菌和大肠杆菌O157多重PCR分子检测研究.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、检验医学2009年2月第24卷第2期LaboratoryMedicine,February2009,Vol24.No2.·101·文章编号:1673-8640(2009)02-0101-05中图分类号:R373.1文献标识码:A空肠弯曲菌、单增李斯特菌和大肠杆菌O157多重PCR分子检测研究凌霞,沙丹,肖勇,张敬平,吴家林(无锡市疾病预防控制中心,江苏无锡210023)摘要:目的建立同时检测空肠弯曲菌、单核细胞增生性李斯特菌(简称单增李斯特菌)和大肠杆菌O157的多重聚合酶链反应(PCR)检测技术。方法根椐空肠弯曲菌mapA基因序列、
2、单增李斯特菌的编码溶血素(hly)基因序列和大肠杆菌的O157抗原(rfbE)基因序列,分别设计了3对特异引物,PCR扩增的目的基因片段为589bp、360bp和194bp;并对反应条件进行了优化。结果对3种致病菌检测,多重PCR检测DNA的敏感度分别为空肠弯曲菌2.264ng、单增李斯特菌37.92ng、大肠杆菌2.100ng,样品检测时间6～8h。结论该方法操作简便,检测周期短,特异性和敏感度高,为同时检测污染样品中空肠弯曲菌、单增李斯特菌和大肠杆菌O157奠定了基础。关键词:多重PCR;空肠弯曲菌;单增李斯特菌;大肠杆菌O157
3、StudyonmultiplexPCRassayfordetectionofCampylobacterjejuni,ListeriamonocytogenesandEscherichiacoliO157LINGXia,SHADan,XIAOYong,ZHANGJing-ping,WUJia-lin(WuXiCenterforDiseaseControlandPrevention,JiangSu210023,China)Abstract:ObjectiveToestablishamultiplexPCRmethodandapplymul
4、tiplexPCRforsimultaneousdetectionofCampylobacterjejuni,ListeriamonocytogenesandEscherichiacoliO157.MethodsAccordingtoDNAsequencesofthemapAgeneofCampylobacterjejuni,thehlygeneofListeriamonoytogenesandtherfbEgeneofEscherichiacoliO157,threepairsofspecificprimerswerescreene
5、danddesignedtocomposeoptimizedsystemandconditionsofmultiplexPCR.Thethreeexpectedsizeswere589bpforCampylobacterjejuni,360bpforListeriamonocytogenesand194bpforEscherichiacoliO157.ResultsThedetectionsensitivityofmultiplexPCRwere2.264ng、37.92ngand2.100ngforCampylobacterjeju
6、ni,ListeriamonocytogenesandEscherichiacoliO157,respectively.ThemultiplexPCRtook6-8hourstodetectasample.ConclusionsTheresultsoftheexperimentsdemonstratedthatthemultiplexPCRassaywasrapid,simple,sensitiveandspecific,Whichestablishimportantfoundationforsimultaneousdetection
7、forthesethreebacteriainpollutedsample.Keywords:MultiplexPCR;Campylobacterjejuni;Listeriamonocytogenes;EscherichiacoliO157空肠弯曲菌(Campylobacterjejuni,C.jejuni)过程中容易被单增李斯特菌污染;空肠弯曲菌是、大肠杆菌O157(EscherichiacoliO157,E.coli二十世纪80年代起受到国内外广泛重视的人畜O157)、单核细胞增生性李斯特菌[简称单增李斯共患病原菌,该菌广泛存在
8、于家禽类动物的肠道特菌(Listeriamonocytogenes,Lm)]等致病菌是引中,污染水源或食物后可引起腹泻的爆发。起肠道细菌性感染和细菌性食物中毒的重要病原常规检测这些致病菌需分离培养、生化和血[1]体。近几
