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《CCK_8法和MTT法检测人前列腺癌PC3细胞活性的最佳条件比.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、第26卷第3期贵州大学学报(自然科学版)Vol.26No.32009年6月JournalofGuizhouUniversity(NaturalSciences)Jun.2009文章编号1000-5269(2009)03-0018-03CCK28法和MTT法检测人前列腺癌3PC3细胞活性的最佳条件比较研究3李宁,万文婷,金林红(贵州大学精细化工研究开发中心教育部绿色农药与生物工程重点实验室,贵州贵阳550025)摘要:以人前列腺癌PC3细胞作为研究对象,探讨了CCK28法和MTT法的最佳实验条件。CCK28的最佳检测波长为450nm,最佳检测时间为加入CCK28试剂后4
2、h,适宜细胞数量范围为258×10-1×10个。在检测抗肿瘤药物阿霉素(ADM)对PC3细胞的增殖影响实验中,发现CCK28法测得数据的线性相关性优于MTT法,并且数据偏差较MTT法小。实验结果表明CCK28法较MTT法检测的灵敏度高,准确性好,是一种优于MTT法的检测细胞增殖活性的方法。关键词:CCK28;MTT;前列腺癌;细胞增殖中图分类号:Q2-33文献标识码:A检验细胞存活与增殖的方法很多,如同位素释BIO);生物洁净安全柜(江苏苏净)。MTT(美国放法、乳酸脱氢酶释放改良法、流式细胞仪法等,自SIGMA)溶解在过滤除菌的1×PBS(PH7.4,NaCl198
3、3年Mosmann建立MTT比色法以来,由于其0.8%,KCl0.02%,Na2HPO40.14%,KH2PO4简单、经济、快速、无放射性污染等特点,已成为细0102%),终浓度0.5mg/mL;CCK28试剂盒(碧云胞生物学及相关研究领域一种分析细胞活性、生长天生物技术有限公司);SDS(北京鼎国生物技术发[1]增殖的常用方法。但由于MTT经活细胞线粒体展有限公司)溶解在10mol/L的盐酸中,终浓度为脱氢酶转化生成的蓝紫色结晶物不是水溶性的,吸10%;DMSO购自生工生物工程(上海)有限公司;出培养基时往往带出结晶或细胞,对实验结果造成注射用盐酸阿霉素(Adria
4、mycin,ADM)购自浙江海影响。为克服MTT的不足,近年来,出现了另外一正药业股份有限公司;10%胎牛血清(杭州四季青[2][3]些检测方法如MTS法、WST21法、CellCount2生物工程材料有限公司);RPMI1640培养基(美国[4]ingKit28(简称CCK28)法等。CCK28法的检测GIBCO公司)。原理与常规MTT法略有差异,检测条件也不尽相1.2方法同,试剂经活细胞线粒体脱氢酶转化后形成水溶性1.2.1最佳检测波长的确定和最佳测定时间的确定结晶,可直接进行比色,实验误差较小。本文对取对数生长期的前列腺癌PC3细胞,以MTT法和CCK28法检测
5、人前列腺癌PC3细胞活性0125%胰酶消化,计数,接种于96孔培养板内,使的实验条件进行探讨,并比较两种方法的灵敏度和每孔细胞密度为1×104个,每组设4个平行孔并准确性。设不含细胞的空白对照,37℃培养24h使细胞贴1材料与方法壁。CCK28组每孔加入10μLCCK28试剂,继续培1.1材料养1-8h,期间分别检测1h、2h、4h和8h时不1.1.1细胞株同波长下的OD值;MTT组吸掉上清液,每孔加入前列腺癌细胞株PC3(购自中科院上海细胞100μL含MTT试剂的培养基,继续培养1-8h,期生物学研究所细胞库)。间分别检测1h、2h、4h和8h时不同波长下的1.1.
6、2仪器和试剂OD值(检测时每孔加入100μL10%的SDS,震荡CO2培养箱(日本SANYO);酶标仪(美国使甲臢晶体溶解)。3收稿日期:2009-03-26基金项目:国家自然科学基金项目(20662004)作者简介:李宁(1982-),男,山东滕州人,硕士研究生,研究方向:抗肿瘤药物筛选和作用机制研究,Email:fairyln18@163.com.3通讯作者:金林红,Email:linhong.j@gmail.com.第3期李宁等:CCK28法和MTT法检测人前列腺癌PC3细胞活性的最佳条件比较研究·19·1.2.2细胞数量与吸光度的关系1.3统计学分析取对数生长
7、期的前列腺癌PC3细胞,以实验数据用统计分析以SPSSv13.0软件进0125%胰酶消化,计数,接种于96孔培养板内,每行。4孔细胞密度从高到低依次为:5×10/个,2.5×2结果443310/个,1.25×10/个,6.3×10/个,3.1×10/个,2.1最佳检测波长的确定32221.6×10/个,8×10/个,4×10/个,2×10/个,各如图1所示:CCK28法在450nm波长处检测时设4个复孔,37℃培养24h后,分别加入CCK28起吸收峰最高,CCK28法最佳检测波长为450nm.由试剂和MTT溶液,在酶标仪上测量OD值。图2可知MTT法
