MTT法检测细胞活性.doc

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1、MTT法检测细胞活性MTT法检测细胞活性原理：活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶（SDH）能使MTT还原为甲瓒（formazan,水不溶性蓝紫色结晶）；死细胞无此功能，二甲基亚砜（DMSO）可溶解细胞中甲瓒，用酶标仪在490nm波长处测定其吸光度（OD）值，在一定细胞数范围内，MTT结晶形成量与活细胞数成正比，活细胞数越多，OD值越大，细胞活性越强。MTT法检测细胞活性步骤：1MTT溶液配制：将MTT配制成5mg/mL溶液，溶剂为磷酸缓冲盐溶液（PBS）；4℃避光保存即可。注意事项：MTT有致癌性，避免皮肤直接接触；2接种细胞：含1

2、0%胎牛血清的培养液配成单个细胞悬液，以每孔1000-10000个细胞接种于96孔培养板中，每孔体积200uL；3细胞培养：将培养基移入CO2孵箱中，在37℃、5%CO2等适宜条件下培养，至细胞单层铺满孔底，贴壁（培养时间应根据实验目的和要求决定）；加入一定浓度梯度的药物；45%CO2，37℃孵育16-48h,倒置于显微镜下观察。5每孔加入10uL，MTT溶液（5mg/ml,pH=7.4），继续培养4h,若药物与MTT能够反应，可先离心后弃去培养液，小心用PBS冲2-3遍后再加入含MTT培养液；6终止培养，吸去孔内培养液；7每

3、孔加入100uLDMSO,置于摇床上低速振荡10min,使结晶物充分溶解；8在酶联免疫检测仪490nm处测量各孔吸光度值，以时间为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制细胞生长曲线。