欢迎来到天天文库
浏览记录
ID:24322474
大小:49.50 KB
页数:4页
时间:2018-11-13
《mtt法检测白头翁对人肺巨细胞癌细胞株pg细胞增》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、MTT法检测白头翁对人肺巨细胞癌细胞株PG细胞增【摘要】观察中药白头翁对人肺巨细胞癌细胞株PG细胞增殖的影响。采用噻唑蓝(MTT)比色法检测PG细胞增殖的状况。结果表明:不同浓度的白头翁含药血清对肺癌细胞PG增殖有抑制作用,且呈明显的时效和量效关系。白头翁含药血清在体外可有效抑制肺癌细胞PG的生长,具有一定的细胞毒性作用。【关键词】MTT法;白头翁;肺癌细胞PG;抑制增殖;细胞毒作用1引言 中药白头翁为毛茛科植物白头翁的干燥根,具有清热解毒,凉血止痢之功效。现代药理研究表明白头翁具有抗肿瘤、抗菌、消炎、增强免疫功能等作用。我们采用MTT法观察了白头翁含药血清对肺
2、癌细胞PG增殖的影响,为探讨白头翁抗肿瘤细胞作用机制,以及白头翁抗肿瘤的开发和研制提供了依据。 2实验材料 白头翁购自济南市建联中药店,并由山东中医药大学药学院生药系石俊英教授鉴定。 人肺巨细胞癌细胞株PG细胞,由山东省医学科学院基础所提供。 3实验动物 I1640培养基,Gibco公司产品;小牛血清,杭州四季青生物材料研究所;二甲基亚砜(DMSO),Sigma公司产品;噻唑蓝(MTT),Sigma公司产品;顺铂(DDP),齐鲁制药有限公司。 5实验方法 5.1白头翁水提取物的制备 称取白头翁200g,加适量水浸泡1~2h,水煎煮提取两次,合并提取
3、液,浓缩成一定浓度(剂量为50g生药/kg),即得白头翁水提取物。 5.2含药血清的制备 取I1640培养液于37℃、5%CO2条件下培养,隔日传代。取对数生长期细胞进行实验。 5.4MTT法检测[1-3] 取对数生长期PG细胞,调整细胞浓度至2×105/ml,按每孔2×105接种于96孔培养板,培养24h,细胞贴壁后,吸去上清液,分组,每组3个复孔,分组为正常血清组(浓度为10%)、白头翁含药血清组(浓度分别为5%、10%、15%)、化疗组(1ug/mlDDP)和综合组(1ug/mlDDP+5%白头翁含药血清、1ug/mlDDP+10%白头翁含药血清、1
4、ug/mlDDP+15%白头翁含药血清)[1-2]。分别培养24、48、72h后加入MTT(5mg/ml)20μl,37℃继续培养4h后弃上清终止培养;每孔加入DMSO200μl,37℃振荡10min,在酶标仪490nm处测各孔光吸收度(OD),计算各组细胞的生长抑制率[3]。生长抑制率=[(对照组平均OD490值—实验组平均OD490值)/对照组平均OD490值]×100%。结果见表1。表1白头翁对人肺巨细胞癌细胞株PG细胞生长抑制作 6讨论 四唑盐(MTT)比色试验是一种检测细胞存活和生长的方法。活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性的MTT还原为难溶性的
5、蓝紫色结晶物(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的紫色结晶物,用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测,大规模的抗肿瘤药物筛选,细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。本实验以MTT法检测观察白头翁含药血清对PG细胞株的细胞毒作用,结果表明,白头翁含药血清对PG细胞增殖有明显抑制作用,不同浓度含药血清对PG细胞增殖呈现出不同程度的抑制作用,随作用时间的延长抑制作用逐渐增强,呈现一定的时效和量效关系;含药血清与DDP合用,能明显增加DDP的细胞
6、毒作用。以上结果提示白头翁不仅有直接抑制肿瘤细胞生长的效果,对化疗药物也有增敏作用,为白头翁抗肿瘤作用的临床应用和新药开发提供了一定依据。【
此文档下载收益归作者所有