白血病-AFX急性髓系白血病的研究.pdf

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1、·236·白血病·淋巴瘤2013年4月第22卷第4期JournalofLeukemia＆Ly~mhoma,Ap一!Q，!：丝，：!·短篇论著·由骨髓增生异常综合征转化伴稀有融合基因混合谱系白血病．AFX急性髓系白血病的研究李正仇惠英张茜魏计锋祁小飞胡晓慧徐杨岑建农陈艳王元元陈子兴【摘要】目的对1例由骨髓增生异常综合征(MDS)转化伴稀有融合基因混合谱系白血病(MLL)一AFX的急性髓系白血病(AML)患者进行确诊。方法骨髓涂片及多重反转录聚合酶链反应(RT．PCR)，检测患者骨髓原始细胞比例及融合基因的表达

2、。结果患者骨髓单个核细胞中检测到稀有融合基因MLL—AFX的表达。结论该例患者为MDS转化伴稀有融合基因MLL．AFX的AML，患者预后差。【关键词】骨髓增生异常综合征；混合谱系白血病一AFX；白血病，髓细胞，急性涉及混合谱系白血病(mixedlineageleukemia，MLL)基因1．2方法的重排位于l1号染色体的二区三带(1lq23)，5％的急性髓系1．2．1骨髓涂片检查白血病(AML)可以检测到MLL基因重排，MLL基因已成为世患者接受骨髓穿刺检查，涂片后放于染色架上，用滴管将界卫生组织所定义AM

3、L中的一个特殊亚型_11。MLL重排可见于瑞特染液滴于涂片上，覆盖整张涂片，放置1—3min。加入等量儿童和成年人的急性淋巴细胞自血病(AI』IJ)、AML、混合表型的磷酸缓冲液或蒸馏水，与染液混匀，室温下5—10min。染色的白血病、骨髓增生异常综合征(MDS)，而最具代表性的是结束后，先用蒸馏水或缓冲液将涂片上的染液直接冲掉，再将急性粒单核细胞白血病(M4)或急性单核细胞白血病(M5)日。片子用自来水温和冲洗至血液膜呈淡红色，甩干或晾干玻片后另有研究显示MLL重排甚至还可以出现在子宫疾病。涉及显微镜下分

4、析。MLL基因重排的自血病大多恶性程度高，对化疗不敏感，缓解1．2．2多重反转录．聚合酶链反应(RT-PCR)检测MLL—AFX率低【5．61。目前MLL已有超过3O种不同的对手基因得到了鉴融合基因定【IJ，但是涉及到x和11号染色体易位或插入的MLL重排病骨髓单个核细胞的分离：患者骨髓1～5ml，EDTA抗凝，例却比较罕见，国外数据库仅见8例报道[71。我们最近诊断了密度离心分离单个核细胞(MNC)，计数，洗涤后一80℃保存备1例由MDS转化的成年AML—M2患者，其x染色体和11号染用。总RNA提取及反

5、转录：(0．5—1．0)X10的MNC，加入色体发生易位，从而导致了MLL—AFX融合基因的形成。TRIzolreagent1ml，充分混匀，加入0．2ml氯仿，离心取上清l资料与方法液，加入0．5m1异丙醇沉淀RNA，75％乙醇洗涤、干燥并用DEPC液溶解，取RNA质量合格的样品反转录。反转录体系为1．1临床资料RNA2txg，Randomprimer1g，dNTP(10×)2txl，DTI"4×患者，男，58岁，因发现血小板(Plt)减少5年余入院。患(10mmol／L)，RNasin20U，补水至40

6、。所得cDNA于一20℃者5年前因齿龈渗血，在当地医院查血常规示：Plt65X109／L，保存备用。多重PCR检测：参见文献【8】，第1轮PCR引物，未进一步诊治。2．5年前在连云港市第一人民医院住院诊治，查MLLF1：51-CCGCCTCAGCCACCTACTAC．3’，MLLF2：5'-AGCAC骨髓象考虑MDS，予益血生、甲钴胺等治疗，院外检测血常规TCTCTCCAATI'GGCAATAGT．3’，AFX1R：5'-GGGTGACTGGCAPlt(70～80)X10／L。1周前在当地医院查血常规：白细

7、胞GCACAGAT-3。反应体系：5lcDNA，multiplexmixtures20l，(WBC)2．79X10／L，血红蛋白(Hh)74g／L，Pit8X10／L。共25l，反应条件：95℃预变性15min；58cc30S，72℃为进一步诊治于2012年1O月2513再次入院，患者无特殊不1min，95℃30S，共30个循环。第2轮PCR引物，MLLF1：5’一适，查体阴性。入院后完善相关检查，并给予止血、促造血等支GGACCGCCAAGAAAAGAAGT一3’，MLLF2：5’一AGCAGATGGAG

8、持治疗。查血常规：WBC1．80x10／L，Hb68g／L，Plt8XTCCACAGGATCAG一3’，AFX1R：51-GGA10／L，异常细胞0．20。血凝常规、生化系列、输血前常规检查ACT．3．，取第1轮反应产物1l，24lmuhiplexmixtures，共均无异常。25l，反应条件：95℃15min；58℃30s，72℃1rain，95oC30s，共20个循环；72℃10min。扩增产物经1．5％琼脂