急性髓系白血病的分子诊断的研究

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1、华中科技大学博士学位论文中文摘要急性髓系白血病遗传学异常的常规检查目的:采用细胞遗传学和分子遗传学方法筛查初诊急性髓系白血病患者的遗传学异常。方法:收集初诊205例急性髓系白血病患者的骨髓，分离骨髓单个核细胞提取基因组DNA并登记基本临床资料。应用染色体显带技术分析患者核型；应用普通聚合酶链反应（PCR）方法检测融合基因以及FMS样酪氨酸激酶3基因的内部串联重复（FLT3-ITD）；应用PCR产物测序的方法检测核磷蛋白（NPM1）、CCAAT增强子结合因子α（CEBPα）和C-kit基因的突变。结合临床资料分析检测结

2、果。正常对照为结果:205例患者中核型可供分析的有166例；融合基因结果可供分析的有202例。检测到FLT3-ITD基因突变45例；检测到NPM1基因突变34例；检测到CEBPα基因突变61例；检测到C-kit基因突变16例。FLT3-ITD、NPM1、CEBPα基因突变都与正常核型相关，但分别与不同FAB亚型相关。C-kit基因突变与t(8;21)易位相关。结论：结合细胞遗传学和分子遗传学方法能有效检测初诊急性髓系白血病患者的遗传学背景。关键词：NPM1;FLT3;CEBPα1华中科技大学博士学位论文急性髓系白血病

3、IDH1及IDH2基因突变研究目的：本研究旨在研究205例急性髓系白血病患者中IDH1(Isocitratedehydrogenase1)和IDH2(Isocitratedehydrogenase2)基因的突变发生率及其临床特征。方法：收集并提取205例急性髓系白血病患者的骨髓，分离出单个核细胞基因组DNA。然后通过PCR的方法分别扩增IDH1基因和IDH2基因的第4号外显子，将PCR产物纯化后测序。最后再通过我科标本库资料了解IDH1和IDH2基因突变阳性患者的临床特征。结果：在205例急性髓系白血病患者中共发现1

4、0例(4.9%)IDH1突变，包括M12例，M26例，M31例，M51例。突变类型包括R132H6例，R132S2例，R132G2例。经统计学分析，IDH1突变与年龄、染色体、融合基因及FLT3、C-kit、NPM1的突变无明显相关性(P＞0.05)；与性别、分型和CEBPα突变有显著相关性(P＜0.05)。在205例急性白血病患者中共发现15例(7.3%)IDH2突变，包括M12例，M24例，M59例。突变类型包括R140Q10例，R140W1例，R172K4例。经统计学分析，IDH2突变与年龄、性别、分型、染色体

5、、融合基因及FLT3、C-kit、NPM1、CEBPα的突变无明显相关性(P＞0.05)。结论：本研究提示在成人AML中：IDH1突变易发于男性患者和AML-M2型白血病，并且不易合并CEBPα突变；尚未发现IDH2突变与其他临床特征有明显相关性。这可能与本研究的样本量较少有关，需要扩大样本量进一步研究IDH1与IDH2突变与急性髓系白血病形成、发展、治疗及预后的关系。关键词：急性髓系白血病；IDH1；IDH2；基因突变2华中科技大学博士学位论文急性髓系白血病DNMT3A基因突变研究目的：本研究旨在探讨急性髓系白血病

6、（acuteMyeloidleukemia，AML）患者中DNA甲基转移酶3A（DNAmethyltransferase,DNMT3A）的突变发生率、与其他临床指标之间的相互关系以及对预后的影响。方法：收集205例急性髓系白血病的患者的骨髓，分离骨髓单个核细胞提取基因组DNA,并采用PCR技术对DNMT3A所有外显子进行扩增，将PCR产物纯化后测序；SNP方法验证DNMT3A突变位点；在已建立的NOD/SCID小鼠AML模型中筛查DNMT3A突变；利用生物信息学软件对已有的AML全基因组表达谱数据聚类分析及发掘与DN

7、MT3A突变AML相关的基因；通过我科标本库资料了解DNMT3A基因突变阳性患者的临床特征。结果：在205例AML患者中共发现20例（9.76%）具有DNMT3A基因突变。包括M01例，M23例，M31例，M41例，M514例；突变类型包括R882H14例，R882C3例，F732V1例，P904L1例，R736C1例。67例正常核型AML患者中13例DNMT3A突变（19.4%），65%的突变出现于CN-AML中。同样的突变在SNP及AML小鼠模型中得到验证。在有完整统计数据的109例AML患者中，DNMT3A阳性

8、患者CR率（50%），DNMT3A阴性患者CR率（66.67%，P＜0.05），有显著统计学意义。DNMT3A与性别、CEBPα、C-kit、IDH1的突变以及MLL的表达无明显相关性（P＞0.05）；与IDH2、NPM1、FLT3突变以及IKAROS6表达有极显著相关性（P＜0.01）。结论：DNMT3A基因突变常见于CN-AML患者，且具有