急性髓系白血病细胞flt

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1、急性髓系白血病细胞Flt作者：汪亚伦，王彤，许凤，冮岩，王杰【摘要】本研究探讨急性白血病（acuteleukemia，AL）细胞株Flt-3基因表达和Flt-3/ITD突变与急性白血病特别是急性髓系白血病(acutemyeloidleukemia，AML)发病的关系。采用RT-PCR分析联合测序的方法检测82例白血病细胞株，其中包括20例AML细胞株和57例急性淋巴细胞白血病细胞株（ALL），5株CML细胞株的Flt-3表达和Flt-3/ITD突变。结果表明：77例AL细胞株中有48例Flt-3表达阳性，阳性表达率为62%，其中20例AML细胞株中有12例

2、阳性，阳性表达率为60%；57例ALL细胞株中有33例阳性，阳性表达率为58%。5例CML细胞株中有3例阳性，阳性表达率为60%。12例Flt-3表达阳性的AML中有1例AMOL细胞株存在有异常表达（阳性率为8.3%），测序显示存在有29bp的两个编码重复序列，其余Flt-3表达阳性的细胞株未检出重复序列。未分化B细胞系Flt-3基因表达阳性率明显高于成熟B细胞ALL(P<0.05)。结论:Flt-3基因在不同种类的白血病细胞中存在着不同程度的表达，在其中1例AML中发现有Flt-3/ITD重复序列。Flt-3基因及Flt-3/ITD突变检测可能有助

3、于ALL特别是AML的诊断。【关键词】Flt-3基因　　AnalysisofFlt-3ExpressionandFlt-3/ITDMutationinAcuteMyeloidLeukemiaCells　　AbstractThisstudyedtoexploretherelationshipbetutationinacuteleukemia(AL)celllineandpathogenesisofAL，especiallyAML.TheFlt-3expressionandFlt-3/ITDmutationethodin82leukemiacelllinesi

4、ncluding20AML，57ALLand5CMLcelllines.TheresultsindicatedthatpositiveresultsofFlt-3expressionalgeneproductin1AMOLcelllineoutof12AMLcelllinesalgeneproductshoinentlyhigherthanthatinmatureBcellALL(P<0.05).ItisconcludedthattheFlt-3expressionisdifferentinvariousleukemiacells.Flt-3/ITD

5、duplicationutationmaycontributetothediagnosisofALL，especiallytoAML.　　Keyutation近年来的研究表明，Fms样酪氨酸激酶3(Fms-liketyrosinekinase3，Flt-3)在正常的造血分化过程中具有重要的作用［1］。人Flt-3基因定位于染色体13q12，具有RTKm成员共同的结构，由胞外5个免疫球蛋白样结构区、近膜区(JM)、穿膜的2个激酶区(TK1和TK2)［由1个激酶插入区(KI)分隔］、C-端胞内区等几部分构成［2］。Flt-3除了在胸腺、肝、脾和淋巴结等组织中表

6、达之外，而且也存在于人骨髓等造血系统，具有诱导造血干细胞分化和增殖的作用。Flt-3跨膜区内部串联重复(internaltandemduplication，ITD)突变是近年来发现的Flt-3基因最常见的一种突变类型，与AML的发生有关，是AML中发生率最高且与预后相关的突变［3］。为探讨Flt-3特别是Flt-3/ITD突变在恶性血液病不同类型、亚型的突变及分布情况，我们运用聚合酶链反应结合测序的方法对不同种类的AL细胞株的Flt-3基因表达和Flt-3/ITD突变进行了研究，探讨Flt-3与AML发生的关系。　　材料和方法　　白血病细胞株　　82个白血

7、病细胞株包括AML细胞株20个(AMLM1/M211个，AMMOLM41个，AMOLM58个)，ALL细胞株57个(c-ALL21个，pre-BALL9个，B-ALL11个，T-ALL16个)和CML细胞株5个。　　细胞的采集　　取用ACD-A抗凝骨髓5ml，常规分离骨髓单个核细胞(BMMNC)，其中2名健康献髓者BMMNC用CD34+免疫磁珠(Stemcell公司)进一步分选收集CD34+细胞待用。采集静脉血，ACD-A抗凝，400×g离心10分钟，分取血浆，置于-20℃冻存供检测用。　　RT-PCR　　总RNA的提取　　用TRIzoL试剂盒(Gibco

8、BRL)，按其说明书提取细胞总RNA。　　cDNA的合成　　取2μ