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1、·616·中国实验血液学杂志JournalofExperimentalHematology2003;11(6):616-621文章编号(ArticleID):1009-2137(2003)06-0616-06·论著·通过FasL通路阻抑肿瘤免疫逃逸的研究胡中波,邹 萍,李爱香,王良利,刘凌波华中科技大学同济医学院血液病研究所,武汉430022摘要 许多白血病和实体瘤细胞通过高表达Fas配体(FasL)而发生肿瘤的免疫逃逸。为了观察腺病毒载体向肿瘤细胞导入小鼠可溶性Fas(sFas)基因后能否阻抑肿瘤细胞通过F
2、asL发生肿瘤免疫逃逸作用,采用AdEasy腺病毒载体系统,利用大肠杆菌内质粒间同源重组的方法分别构建携带小鼠sFas基因及增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的重组腺病毒载体,扩增纯化后利用空斑试验测定滴度,Westernblot检测蛋白的表达。然后,分别感染肿瘤细胞233EL4细胞,用氚胸腺嘧啶核苷(H2thymidine,H2TdR)掺入法检测其诱导靶细胞YAC21的凋亡率。结果表明,获得11了重组成功的复制缺陷的腺病毒载体AdsFas和AdEGFP,密度梯度离心纯化后其滴度达到10pfu/ml,Western
3、blot分析证实前者能够高效表达出sFas蛋白。转染肿瘤细胞EL4细胞之后与YAC21细胞混合培养,导入sFas组的YAC21凋亡率在效靶比(E∶T)为3∶1,10∶1和30∶1时分别为6%、7%和9%,与对照组(分别为28%、37%和45%)相比明显下降,统计学有显著性差异(P<0.01);而导入EGFP组YAC21凋亡率(分别为30%、36%和48%)+与对照组相似,没有统计学差异(P>0.05)。结论:腺病毒介导sFas的导入能够明显抑制肿瘤细胞EL4诱导Fas细胞2YAC21的凋亡,说明通过腺病毒转移s
4、Fas基因,在体外可以达到阻抑肿瘤细胞表面FasL产生的免疫逃逸作用,为寻找新的途径治疗肿瘤提供了方向。关键词 Fas配体;重组腺病毒;肿瘤免疫逃逸;白血病中图分类号 R7301231;R73317文献标识码 AStudyonBlockingtheTumorImmuneEscapebyFasLigandPathwayHUZhong2Bo,ZOUPing,LIAi2Xiang,WANGLiang2Li,LIULing2BoInstituteofhematology,Unionhospital,TongjiM
5、edicalCollege,HuazhongUniversityofScienceandTechnology,Wuhan430022,ChinaAbstractTheexpressionofFasligand(FasL)onthemembraneofmanykindsofleukemiaorsolidtumorcellsplayedanimportantroleintheimmuneescapeoftumorcells.ThisstudywasaimedtoknowifthesolubleFas(sFas),e
6、xpressedbyadenovirus,couldblocktheimmuneescapeoftumorcellsbyFasLpathway.Thetworecombinantadenoviralvectors,AdsFaswithmurinesolubleFasgeneandAdEGFPwithenhancedGFPproteingene,wereconstructedbyhomologousrecombinationbetweentwoplasmidsinEscherichiacoliwiththeAdE
7、asyadenovirusvectorsystem.Theviruseswerepropagatedandpurifiedbytwotimesultracentrifugation.Theirtitresweredetectedbyplaqueassays.TheexpressedproteinwasevaluatedbyWesternblotanalysis.ThenthetumorEL4cellswereinfectedwithAdsFasandAdEGFP3respectively.Theapoptosi
8、sratioofthetargetcells2YAC21cellsinducedbyEL4cellswasrespectivelydetectedbyH23thymidine(H2TdR)labeling.TheresultsshowedthattherecombinantadenoviralvectorsAdsFasandAdEGFPwere11successfullyobtaine
