前脑啡肽原和热休克蛋白参与宿主对结核分枝杆菌感染.pdf

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1、第!"卷!第#期西南师范大学学报!自然科学版"$""%年$月&’()!"!*’)#+’,-./(’01’,234562738./*’-9/(:.8;5-6825?)$""%文章编号!#"""%@A#"$""%#"#"#$B"%前脑啡肽原和热休克蛋白参与宿主对结核分枝杆菌感染的应答!徐!霖#!!!!乐!军!!@!!刘丽蓉!!梁!莉@!!王洪海!!!谢建平$!!#C贵阳师范高等专科学校化学系!贵州贵阳%%"""D"$C西南师范大学生命科学学院现代生物医药研究所!重庆@""A#%"!C复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验

2、室!上海$""@!!"@C上海市肺科医院!上海$""@!!摘要!利用双向电泳比较了由临床分离的结核分枝杆菌感染离体巨噬细胞:E!A前后的全细胞蛋白组表达差异!肽指纹鉴定和生物信息学分析$个表达明显上调的斑点!确定它们分别为热休克蛋白F1G#"%!和前脑啡肽原)比较蛋白质组学和转录组学研究发现!热休克蛋白表达提高可能源于转录增加)提出了从神经免疫学角度研究结核分枝杆菌致病和宿主免疫机理的新思路!为解释吸毒人群中结核病高发病率提供了基础)关!键!词!前脑啡肽原"热休克蛋白"巨噬细胞:E!A"结核分枝杆菌"蛋白质组中图分类号!!"#文献标识码!$结核病目前仍然

3、是严重威胁人类健康的传染病之一)FH,9/.899,.’I508=85.=<;8-,6!FH&$感染%#&和吸毒人群的结核病发病率明显高于其他人群)结核病的致病菌’’’结核分枝杆菌#!"#$%&#’()*+,’+-%$!!&%()#+.$/*/!以下简称JKL$与FH&被称为(难兄难弟)!二者甚至使用树突细胞相同的受体M71HN*)JKL是典型的胞内致病菌!主要在人巨噬细胞等宿主免疫系统的细胞内生存和繁殖!JKL感染的后果与巨噬细胞初期的应答反应有密切的关系)研究JKL’宿主相互作用是认识JKL致病机理的重点和难点之%@&一!有助于新药的开发和设计

4、!为感染性疾病的防治提供基础)另外!寻找JKL感染与FH&感染及吸毒之间的关系!研究FH&治疗药物与JKL治疗药物之间的相互作用!也是更好地开发结核病和OHM1控%%&制药物的基础)本研究利用双向电泳技术结合基质辅助激光解吸及电离飞行时间质谱技术!直接从蛋白质组水平分析巨噬细胞对JKL感染的应答)随后!将蛋白质组学的数据与我们先前得到的基因组转录水平数据结合!整合基因表达不同阶段的数据进行综合分析)%!材料与方法%&%!菌株及其培养临床分离结核分枝杆菌由上海市肺科医院检验科分枝杆菌检验室提供)细菌在J8II(5?-’’PAFE#M80=’$添加QOM7#

5、"C"BR’(58=/=8I!"C%RL1O!"C$RS(,=’65!#@"99’(*T*/7($的液体培养基中!AU条件下培养)!收稿日期+$""@"$$#基金项目+国家重大基础研究EA!资助项目#$""$7L%#$D"@$"国家自然科学基金资助项目#!"#"""A$)作者简介+徐!霖##EA$$!女!贵州贵阳人!硕士!主要从事结核分枝杆菌致病机理研究)通讯作者+谢建平!教授)第#期!!!!徐!霖!等"前脑啡肽原和热休克蛋白参与宿主对结核分枝杆菌感染的应答#$AD的敏感结核分枝杆菌!!AU培养B"D2!至细菌密$""9TJ8II(5?-’’PAFE培养

6、基内接种总数为$V#"度为#V#"DD或B"".9的光密度"O#为"CE左右!@"""-$98.!@U离心#%98.沉淀细菌!用"$V#"B""WFAC@的GL1缓冲液洗涤沉淀细菌$次!加入XGJHY#B@"细胞液体培养基!超声处理$98.!重复!次!去除菌块!血球计数板记细菌数!以确保实验中每次细胞感染的细菌数量相同)%&’!细胞株及其培养人源巨噬细胞:E!A"OK77%7XT#%E!#由复旦大学上海医学院闻玉梅院士赠送)细胞在含有#"R小牛血清&#"":$9T青霉素的XGJHY#B@"细胞液体培养基中!AU条件下培养!培养箱中7Q的浓度为$%R)约培

7、养@D3!细胞达到对数生长期)%&#!主要仪器GXQKZ1*HZ>75((等电聚焦电泳仪&GXQKZO*HH[875((垂直板电泳仪&J’(5=,(/-H9/S5>[凝胶图像扫描仪&GM,562BC"图像分析软件等!均为美国L8’YX/I公司产品):Y!"""分光光度计为FHKO7FH公司产品!质谱分析系统为美国OWW(85IL8’6<62596公司的&’YJ1#)’!方!!法’&%!细菌感染巨噬细胞感染实验时!按照巨噬细胞与细菌#"AD的比例混合!!AU!%R7Q的

8、培养箱中培养$@3)对照]#"$’@(为未感染细菌的巨噬细胞)’&’!细胞蛋白样