不同凝固剂对橡胶树花药培养次生体胚发生的影响

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1、ChinaTropicalAgriculture不同凝固剂对橡胶树花药培养次生体胚发生的影响王祥军李维国黄华孙高新生吴春太张晓飞黄肖(中国热带农业科学院橡胶研究所／国家橡胶树育种中心／农业部橡胶树生物学与遗传资源利用重点实验室海南儋州571737)摘要：以热研7-33-97的花药为材料，分别vXPhytagel和Agarpowder作为凝固剂配i謇制培养基，比较了两种不同培养基对橡胶树花药培养次生体胚发生的诱导效果。结果表擎明，不同凝固剂对橡胶树花药培养次生体胚发生有着显著的影响。Phytagel培养基的次生体胚愈伤组

2、织诱导率显著高于Agarpowder培养基，而且次生体胚愈伤组织在Phytagel3-~养基中的生-R情况明显较Agarpowder培养基好。Phytagel培养基的次生体胚发生率和每块愈伤组织所诱导出的胚状体数目均显著高-Y'Agarpowder3-$~-养基，r~．EAgarpowder3~养基的薹次生体胚易发生褐化和玻璃化现象。但二者所诱导的正常胚状体比例差异不显著。总体≯上，Phytagel培养基诱导橡胶树花药培养次生体胚发生的效果优于Agarpowder培养基。鬻关键词：凝固剂；橡胶树；花药培养；次生体胚发生

3、鏊⋯薹巴西橡胶树(HoVO~brasiliensisMuel1．Arg．)为多培养基、培养方法和条件等，其中培养基的影响尤为重年生异花授粉林木，是天然橡胶的主要来源。迄今为要，这方面的研究主要涉及基本培养基、碳源、激素、止，橡胶树依然主要通过嫁接进行繁殖。其所用砧木活性炭等因素对橡胶树花药愈伤组织诱导和胚状体发生为未经选择的种子实生苗，由于砧一穗互作效应的影的影响[4]。另外，除化学组成外，培养基的物理状态对响，导致同一无性系不同植株间的生势和产量存在一组织培养的影响也不容忽视，如张巧等『J01的研究表明，定程度的异质

4、性I1J。为了解决这一问题，从上世纪50年采用不同类型的凝固剂，棉花组织培养过程中愈伤组织代开始，学者们着手研究橡胶树组织培养技术。目前诱导、体胚发生和植株再生均存在显著差异。在离体微繁[1-3】和体细胞胚胎发生[1,4-7】方面已取得了较凝固剂在培养基中起固定支撑作用，不同种类，甚大成功，在悬浮细胞培养和原生质体培养f81方面也取得至不同厂家生产的同类凝固剂，其成分、纯度和物理性了一定进展。能存在差异，有可能影响到培养基的物理结构和培养物花药培养是巴西橡胶树组织培养的主要技术途径之对营养成分的吸收利用⋯]。目前，橡胶

5、树组织培养采用一的凝固剂主要有植物凝胶(phytage1)[6,12-14]、脱乙酰吉，其培养过程主要分三个阶段：第一个阶段，雄蕊脱分化形成愈伤组织；第二个阶段，愈伤组织分化体胚；兰糖胶[15】和琼脂(agar)【"]等，但是不同种类凝固剂第三个阶段是体胚再生植株[9]。Hua等f6】将花药愈伤组织对橡胶树组织培养的影响及比较研究仍十分欠缺。本研来源的胚状体(初生体胚)切成小的胚块，接种在愈伤究以橡胶树品种热研7—33—97的花药为材料，比较了两组织诱导培养基上分化愈伤组织，再在体胚发生培养基种不同凝固~1]Phyta

6、gel和Agarpowder培养基对橡胶树花上分化胚状体(次生体胚)，以此循环重复，实现了体药培养次生体胚发生的影响，以期为橡胶树花药培养体胚的扩繁。系的进一步优化奠定一定的理论基础和方法基础。目前，尽管通过花药培养已能够获得较多数量的1材料与方法橡胶树组培苗，但与农作物相比，其诱导率总体上仍然1．1植物材料较低。影响橡胶树花药培养的因素主要有外植体材料、以橡胶树品种热研7—33—97为材料，取自中国热带基金项目：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(1630022013001)；现代农业产业技术体系建设专项(nyh

7、yzx07—033—1)。作者简介：王祥军(1984_)，男，助理研究员。主要研究方向为橡胶树遗传育种。通讯作者：李维国(1968一)，男，博士，研究员，主要研究方向为橡胶树育种。E—mail：leewg23@163．com。452013．6总第55期巾翟扭带拄业ChinaTropicalAgriculture剂，一种为国产普通Agarpowder，其价格较另一种凝固brasiliensisembryosfrominvitrocultureofunpolinatedovulesU]．Biotechnology，2008

8、，7(4)：793—797剂Sigma产Phytagel低10～15倍。结果表明，在橡胶树次【16lModesteKK，EdmondKK，GilesKN，etalCallogenesisand生体胚发生过程中，Agarpowder培养基的愈伤组织诱导SomaticembryogenesisinductioninHeveabrasi