资源描述：
《强阳离子交换色谱分离多肽混合物的条件优化》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、2010年4月Vo.l28No.4April2010ChineseJournalofChromatography368~373研究论文DOI:10.3724/SP.J.1123.2010.00368强阳离子交换色谱分离多肽混合物的条件优化1122*王璐,周兰兰,钱小红,张养军(1.安徽医科大学,安徽合肥230032;2.蛋白质组学国家重点实验室,军事医学科学院放射与辐射医学研究所,北京蛋白质组研究中心,北京102206)摘要:以酵母全蛋白提取液的胰蛋白酶切产物为研究对象,对多维色谱分离中常用的强阳离子交换色谱的分离条件,
2、包括上样量、盐的种类、调节缓冲液pH值的酸的种类及有机溶剂的比例进行了考察和比较。结果表明,在强阳离子交换色谱分离线性上样量范围内,在氯化铵溶液作为流动相,用磷酸调节流动相缓冲液pH值至27,且流动相中乙腈的体积分数为30%条件下进行梯度洗脱时,可获得最佳的分离结果。本结果可为采用二维色谱质谱策略分析多肽混合物时的第一维强阳离子交换色谱分离条件的选择提供有益的参考。关键词:强阳离子交换色谱;蛋白质组学;多肽分离中图分类号:O658文献标识码:A文章编号:10008713(2010)04036806Optim
3、izationofconditionsfortheseparationofpeptidemixturesusingstrongcationexchangechromatography1122*WANGLu,ZHOULanlan,QIANXiaohong,ZHANGYangjun(1.AnhuiMedicalUniversity,Hefei230032,China;2.StateKeyLaboratoryofProteomics,BeijingInstituteofRadiationMedicine,BeijingProteome
4、ResearchCenter,Beijing102206,China)Abstract:Theseparationconditionsforstrongcationexchangechromatographywereinvestigatedandcomparedusingtrypticdigestofproteinextractfromyeast.Theconditionsincludedtheloadingamountofthesample,thetypeofthesaltinmobilephase,thetypeofthe
5、acidusedtoadjustthepHofthemobilephaseandtheproportionoforganicsolventaddedintheelutionsolution.Theexperimentalresultsindicatedthathighseparationefficiencycanbeobtainedbyusingammoniumchloridesolutionasoptimalmobilephase,phosphoricacidtoadjustthepHofmobilephasesand30%(
6、v/v)organicsolventinmobilephases.Theresultssuggestedthatabeneficialreferencewaspresentedfortheselectionofseparationconditionsofstrongcationexchangechromatographywhenapplyingintwodimensionalchromatographymassspectrometrystrategyinproteomicresearch.Keywords:strongcat
7、ionexchangechromatography;proteomics;peptideseparation作为二维凝胶电泳分离技术的重要补充,多维离度问题是我们面临的巨大挑战,也对分离技术及色谱分离技术已经在蛋白质组学研究中获得了广泛分离策略提出了更高的要求。目前,针对复杂生物的应用,特别是采用从下向上(bottomup)技术样本,主要采用的是多维分离分析系统,例如应用最对蛋白质组进行分离分析时,多维色谱技术更加受为广泛的方法之一的多维蛋白质鉴定技术(Mud[1-4][5]到重视。作为蛋白质组学核心技术之一的生物PIT
8、),即采用强阳离子交换色谱和反相液相色谱质谱,虽然其具有很高的分辨率,但将其直接用于动两种分离原理正交的分离方法构成多维分离,结合态范围宽、组成极其复杂的生物样品分析时,也很难串联质谱组成一种多维分离鉴定技术。这两种分离获得更多肽段的信息,难以发挥其重要作用,所
