机能学实验标本的制备与疾病动物模型

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1、机能学实验标本的制备与疾病动物模型1。蟾蜍坐骨神经—腓肠肌标本制备（1）如何制备蟾蜍坐骨神经—腓肠肌标本？其主要操作步骤什么？①破坏脑和脊髓：用左手食指、中指夹住蟾蜍的两个前肢，无名指和小指夹住两后肢，拇指按住头，右手持探针沿蟾蜍头顶中央向后滑动，当触及凹陷处时（即枕骨大孔），将探针垂直刺入枕骨大孔，到达脊椎椎管，改变探针方向，向上刺入颅腔，左右搅动捣毁脑组织。将探针退至进针处，再向尾侧方向刺入脊椎椎管，反复提插探针捣毁脊髓。待其四肢松软、呼吸停止，表示脊髓和脑已被完全破坏，否则应按上述方法反复进行；②剪除躯干上部和内脏：用一只手捏住蟾蜍的骶髂关节，另一只手持粗剪刀在骶髂关节水平以上0.5

2、—1cm处剪断脊柱，用组织镊夹住脊柱断端，提起蟾蜍使其头部自然下垂，用粗剪刀沿脊柱两侧剪除头胸部和内脏，保留后肢、骶骨、脊柱及其由它发出的坐骨神经；③剥皮：左手持组织镊夹住脊柱断端，注意镊子不要夹在神经上，右手捏住脊柱背部皮肤的边缘，逐步向下牵拉剥离皮肤。剥至大腿时，如果阻力较大，可先剥下一侧大腿的皮肤，再不另一侧。皮肤全部剥离后，将标本置于盛有任氏液的培养皿中。洗净双手及用过的全部手术器械；④分离两腿：用粗剪刀从背侧剪去骶骨，然后沿脊柱的中线剪开脊柱，再经耻骨联合中央剪开，将蛙腿分成两半，并将分离的标本浸入盛有任氏液的培养皿中（在剪开脊柱和耻骨联合时不要伤及坐骨神经并保持神经的完整）；⑤

3、游离坐骨神经：取一侧下肢标本，用蛙钉将蛙腿背位固定于干净的腊盘上（固定三点：脊柱、膝关节、脚掌）。用玻璃分针沿脊柱侧游离腹腔部坐骨神经，再循骨二头肌和瓣膜肌之间的坐骨神经沟，纵向分离暴露坐骨神经之大腿部分，直至胫腓神经分叉处。取一段缝合线，穿过脊柱根部的坐骨神经，将其结扎并用眼科剪剪断。手执结扎线将神经轻轻提起，顺序向下剪断所有神经分支，将神经搭在腓肠肌上，加滴任氏液。用粗剪刀剪断骨二头肌、瓣膜肌、骨四头肌肌腱，自膝关节周围剪除并刮净所有大腿肌肉，在距膝关节1cm剪断股骨；⑥完成坐骨神经—腓肠肌标本：用玻璃分针穿透腓肠肌跟腱，逐步游离腓肠肌至膝关节处，在腓肠肌跟腱处穿线结扎，提起结扎线，在

4、其下方剪断跟腱。用粗剪刀水平方向伸进腓肠肌和小腿之间，在膝关节处剪断小腿，使其分离。拿掉固定于膝关节处的蛙钉，将制备好的坐骨神经—腓肠肌标本放入盛有新鲜任氏液的培养皿中待用。（2）如何验证蟾蜍坐骨神经—腓肠肌标本的兴奋性：验证神经肌肉标本兴奋性常用的方法有两种：①锌铜弓刺激。将锌铜弓在任氏液中浸湿后触及坐骨神经，如果腓肠肌发生一次明显而迅速的收缩，则表示标本的兴奋性性良好。②用刺激器给与神经一次中等强度的电刺激，如引起肌肉一次明显的收缩，则表示标本的兴奋性性良好。（3）制备坐骨神经—腓肠肌标本时应注意哪些问题？①破坏脑和脊髓前，可先用纱布夹捏蛙头部两侧的耳后腺以排出蟾酥，避免其溅入眼内；如

5、果溅入眼内，应立即用清水冲洗；②破坏脑和脊髓要完全，待其四肢松软、呼吸停止，表示脊髓和脑已被完全破坏，否则应按上述方法反复进行；③皮肤和内脏全部剥离后，须洗净双手及用过的全部手术器械。切勿用自来水冲洗标本；用剪刀沿正中线平分脊柱和耻骨联合时，要保证神经的完整，不要伤及神经；④分离标本时，只能用玻璃分针，不可用金属器械分离或用手触摸标本。以免其对神经和肌肉的损伤；⑤分离神经干和其分支时，动作须轻柔，避免过度牵拉和其它不良刺激；⑥股骨的保留长度应为1cm左右，便于固定标本；⑦制作标本过程中，为防止标本干燥，须滴加任氏液，使其保持湿润；⑧标本制成后，用锌铜弓或中等强度电流单个刺激标本，验证标本的

6、兴奋性是否良好；⑨标本制成后，应立即将其置于新鲜任氏液中，待其兴奋性稳定后方可进行实验。2．蟾蜍坐骨神经—缝匠肌标本制备（1）制备坐骨神经—缝匠肌标本制备的方法是什么？一侧蟾蜍腰背下肢标本的方法同坐骨神经—腓肠肌标本制备1-4项相同。取一侧下肢，用蛙钉背位固定在蛙板上，在分离前要先辨认缝匠肌。缝匠肌起自耻骨的外侧，止于胫骨上端，是一条狭长而肌纤维平行的薄片状骨骼肌。确认缝匠肌后，用玻璃分针分别分离并剪去缝匠肌的内、外侧肌膜。坐骨神经分支由缝匠肌的中部内侧进入肌肉，分离肌膜时要仔细，先由上而下分离外侧，再分离内侧。从内侧分离到肌肉下1/3近中线处时，可以看见一条较细的神经进入肌肉时分成两条细

7、小分支。沿此细小神经向中枢端分离，在大收肌和大内直肌的下方伴随着血管向上走行，于股骨头处汇入坐骨神经，用眼科剪由上而下剪断神经干周围的分支及附着在神经表面的结缔组织，直至进入缝匠肌部位。用玻璃分针在缝匠肌下方肌腱出轻轻挑起，并穿线结扎，剪断缝匠肌与耻骨端和胫骨端的联系，将神经与肌肉轻轻提起，放置盛有任氏液的培养皿中10-20min，待其兴奋性稳定后，便可进行实验。（2）制备坐骨神经—缝匠肌标本常遇到的问题是什么？如何解决