微生物的接种分离和纯培养.ppt

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1、微生物的接种分离和纯培养什么是纯种培养？自然界中的微生物都是杂居在一起的，通过分离，使它们由混杂状态到单个个体在固体培养基上成为一个菌落，就获得纯种。原理是将待分离的样品进行一定的稀释，使之分散，在固体培养基上形成单个菌落，再转接到适当的培养基上，就认为是纯种。接种技术接种技术是将微生物接到适于生长繁殖的人工培养基或生物体内的过程。接种方法：斜面接种、液体接种、半固体穿刺接种等接种工具：接种环、接种针、移液管和刮铲等接种必须在严格无菌的环境中进行！菌其试验材料种：四联球菌，大肠杆菌，枯草杆菌，变形杆菌，混合菌液培养基：牛肉膏蛋白胨液体培养基，牛肉膏蛋白

2、胨固体培养基，牛肉膏蛋白胨半固体培养基他：接种针，接种环，培养皿，吸管，记号笔等无菌操作1.将菌种斜面和待接种新鲜斜面夹在左手的食指、中指和无名指之间，大拇指按在两只试管中间。右手旋松棉塞，便于拔出；2.右手拿接种环，垂直于火焰中，环端及伸入试管中部分均充分灭菌；3.右手无名指、小指和手掌边夹住两试管棉塞，轻拔出，试管口过火后移开，仍靠近并面向火焰；4.将接种环伸入试管，稍冷后沾取少量菌体实验步骤之一接种法斜面接种技术：从已长好的菌种斜面上挑取少量菌种移至另一新鲜斜面培养基上液体接种技术：不同在于接入到液体培养基中穿刺接种技术：用接种针从菌种斜面上挑取

3、少量菌体并穿刺到半固体培养基中斜面接种技术（1）斜面接种技术（2）1.接种前在待接种斜面试管上用记号笔注明菌名、接种日期、接种人姓名等；2.接种用接种环经无菌操作将菌种挑取少量菌体；3.将接种环引入待接种的斜面，自下而上在斜面上划一直线或曲线即可；4.取出接种环，将试管口再次过火后塞上棉塞，灼烧用过的接种环并放回原处；5.将棉塞塞紧，放入37℃恒温培养箱内培养24小时。液体接种技术1.以无菌操作挑取少许菌体引入待接种的液体培养基中，在接近液面处的试管壁上轻轻摩擦，适当摇动，使之均匀分布在液体中；2.塞紧棉塞后，放入37℃恒温培养箱内培养24小时。穿刺接

4、种技术1.用接种针以无菌操作挑取少许菌体穿刺与半固体培养基中间，刺至管底，再按原途退出。穿刺时要做到手稳、动作轻巧、快速；2.塞紧棉塞后，放入37℃恒温培养箱内培养24小时观察结果。实验步骤之二分离法琼脂平板划线分离法稀释分离法琼脂平板划线分离法1.牛肉膏蛋白胨琼脂培养基加热熔化后，冷却至45℃左右；2.左手持盛培养基的三角瓶，在火焰附近，用右手手掌边夹取棉塞，将三角瓶转移到右手，瓶口过火；3.左手取一无菌培养皿，在火焰边稍稍打开皿盖，倒入培养基15ml左右，放在桌面上轻轻摇匀，待凝后即成平板；4.以无菌操作用接种环沾取待分离的混合菌液；5.左手持培养

5、皿底并使其面向火焰，划线，划线距离恰当（尽量靠近，但线与线勿碰到），6.盖上培养皿盖，倒置于37℃恒温培养箱中培养24-48小时后观察结果；平板划线法其他划线方法稀释分离法操作1.取无菌生理盐水（NaCl0.85%)试管三支（每支4.5ml)，编号Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ；2.无菌操作取混合菌液一环于Ⅰ中，摇匀；3.同法自Ⅰ管至Ⅱ，自Ⅱ管至Ⅲ；4.用1ml无菌吸管，分别从Ⅲ、Ⅱ、Ⅰ管中吸取0.2ml于三个无菌培养皿中，编号；5.倒入熔化冷却至45℃左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基15ml左右，轻轻摇匀，待凝后倒置于37℃恒温培养箱中培养24-48小时观察结果。稀释分离法

6、示意图注意事项1.过程的无菌操作；2.稀释分离法中熔化后的培养基倒平板前的温度控制；3.稀释法中用吸管取试管中液体的顺序。思考题1.微生物的纯种分离通常采用那些方法，并说明个方法的特点。2.什麽叫微生物的污染？如何防止？