微生物的分离和纯培养

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1、第二章微生物的纯培养和显微技术微生物的分离和纯培养显微镜和显微技术§1微生物的分离和纯培养无菌技术用液体培养基分离、培养用固体培养基分离、培养二元培养物分离、培养选择培养分离单孢子分离微生物分离方法微生物的保藏技术微生物纯种分离将多种混杂微生物，经某种技术或方法分离成纯种的过程纯培养（pureculture）在适宜条件下培养纯种获得的培养物（群体）单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度可以形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体，称为菌落(colony)。菌落一个菌落是一个纯种，也是一个纯培养；单

2、个微生物只在固体培养基上形成菌落；在液体培养基中不会形成菌落同一细菌在不同的培养平板上形成不同的特征菌落一、用固体培养基（营养琼脂平板）分离纯种微生物样品多种混杂某种方法分散成单个微生物平板培养单菌落每个菌落为纯种（纯培养）单菌落转接培养纯种（纯培养）（一）、微生物纯种分离的原理和方法（二）、纯种平板分离的不同方法从土壤中分离纯微生物104/ml103/ml102/ml101/ml涂布平板法稀释倒平板法1、涂布平板法（spreadplatemethod)2、稀释倒平板法（倾注平板法）（pourplatemethod)分

3、区划线法（蛇形线法）操作图第一区划线灭菌接种环第二区划线灭菌接种环第三区划线灭菌接种环3、平板划线法（streakplatemethod）分区划线法适用范围：适用于浓度较大的样品连续划线法操作图连续划线法适用范围：适用于浓度较小的样品培养严格厌氧微生物4、稀释摇管法（dilutionshakeculturemethod)二、用液体培养基分离纯化培养个别细胞较大的细菌原生动物、藻类接种物液体培养基顺序稀释法分离营养琼脂平板不能长菌落如何分离纯培养？培养物在液体培养基中进行高度顺序稀释，如果经稀释后的同一稀释度的大多数（9

4、5%以上）试管中没有微生物生长，有微生物生长的试管得到的培养物可能就是纯培养物。上节课知识回顾微生物分离纯化方法用固体培养基分离、纯培养稀释倒平板法涂布平板法平板划线法稀释摇管法用液体培养基分离、纯培养三、单细胞（单孢子）分离采用显微分离法从混杂群体中直接分离单个细胞或单个个体进行培养以得到纯培养，称为单细胞（单孢子）分离法。个体较小的微生物需采用显微操作仪分离难度与细胞或个体的大小成反比营养琼脂平板上不能形成菌落较大的微生物可使用毛细管提取Eachcolonywasexaminedmicroscopically四、选

5、择培养分离创造适于目的微生物生长条件原理促使目的微生物快速生长呈优势菌抑制非目的微生物生长从混杂微生物中分离目的微生物1、利用选择培养基进行直接分离选择培养基只允许特定微生物生长，而同时抑制或阻止其他微生物生长的培养基土壤目的菌优势非目的菌选择培养基直接分离单细胞选择培养基平板（含牛奶或酪蛋白唯一C、N源）37℃培养目的菌落菌落周围有透明蛋白水解圈1、利用选择培养基进行直接分离例一：分离筛选蛋白酶产生细菌含牛奶选择培养基目的菌生长平板营养选择因子：牛奶或酪蛋白只允许分解利用蛋白质的目的菌生长，淘汰非目的菌长出的目的菌并

6、不一定是同种细菌，但皆产蛋白酶例一：分离筛选蛋白酶产生细菌例二：分离筛选产高温淀粉酶（65℃）细菌单细胞选择培养基平板（淀粉为唯一C源）65℃培养淀粉水解透明圈目的菌菌落选择因子：营养选择因子淀粉环境选择因子65℃高温人为创造一些条件只让所需的微生物生长，在这些条件下，所需要的微生物能有效地与其他微生物进行竞争，在生长能力方面远远超过其他微生物。2、富集培养法富集培养是分离微生物菌种最强有力的技术之一营养选择因子和生理条件选择因子可无穷尽组合，可从自然界选择分离各类特异微生物例：从土壤中分离能产生ß－半乳糖苷酶的微生物

7、富集培养选择培养基分离目的菌验证如果培养物中只含有两种微生物，而且是有意识的保持两者之间的特定关系的培养物称为二元培养物。五、二元培养物病毒和宿主细胞纤毛虫、变形虫和粘细菌微生物纯培养分离方法的比较方法应用范围稀释倒平板法涂布平板法平板划线法稀释摇管法液体稀释法单细胞分离法选择培养分离即可定义,又可定量,用途广泛用得最多方法简便,多用于分离细菌主要分离严格厌氧菌适用于培养细胞较大的微生物局限于高等专业化的科学研究适用于分离某些生理类型较特殊的微生物六、无菌技术在分离、转接及培养纯培养物时防止其被其他微生物污染的技术称为

8、无菌技术。它是微生物研究进行的关键。用于分离、培养微生物的器具事先不含任何微生物在转接、培养微生物时防止其他微生物的污染1、所用物品的灭菌技术A、玻璃或金属器皿灭菌高温干热灭菌：干燥箱160－170℃干热空气2h灭菌湿热灭菌：高压蒸汽灭菌锅121℃湿热灭菌30minB、培养基或溶液的灭菌湿热灭菌：高压蒸汽灭菌锅121℃湿热灭菌30