培养大鼠脑皮层神经元损伤后c-fos蛋白表达.doc

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1、培养大鼠脑皮层神经元损伤后C-f0S蛋白表达培养大鼠脑皮层神经元损伤后c-fos蛋白表达更新日期:2010-09-08王克万杨志焕王正国朱佩芳包新民舒斯云陈长才【摘要】目的观察培养的大鼠皮层神经元损伤后C-fos蛋白表达,探讨其在继发性脑损伤中的作用。方法混合培养10〜12天SD胎鼠的皮层神经元分别用谷氨酸和机械划痕损你采用SP法进行免疫组化双重标记反应。结果谷氨酸作用后2小时,c-fos蛋白开始表达,4小时后在核中明显浓聚。创伤后2小时仅在创道边缘直接损伤部位有c-fos蛋白表达，远离创道未直接损伤区的神经元在创伤后4小时才出现;少数神经元突起远端有明显

2、c-fos蛋白颗粒;损伤后6小时神经元突起开始崩解，但c-fos蛋白颗粒仍未消失。结论谷氨酸损伤可引起培养的神经元c-fos蛋白的大量表达,损伤后培养皮层神经元和胶质细胞可以释放出神经毒性物质，培养神经元损伤后c-fos蛋白过度表达可能与凋亡有关。【关键词】C-fos蛋白神经元培养谷氨酸继发性脑损伤Expressionofc~fosProteinAfterCuituredCorticalNeuronInjuryinRatsWANGKe-wan,YANGZhi-huan,WANGZheng-guo,etal.ResearchInstituteofSurger

3、y,ThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing400042[Abstract]AimToobservetheexpressionofc~fosproteininculturedcorticalneuronssubjecttoeitherglutamateormechanicalinjuryinrats,andtostudytheeffectofc-fosproteinonbraininjury.MethodsMixedculturedcorticalneuronsfromSDratswereinjuredbyeithe

4、rglutamateormechanicalforce,thentheexpressionofc-fosproteinwasstudiedwithdouble~labeledimmunohistochemistry・ResultsTwohoursafterglutamateinjury,theexpressionofc-fosproteinbeganinthenucleiand4hourslateritreachedpeak,andc-fosproteinonlyexpressedinthedirectinjuredareaattheedgeoftraum

5、atictractsafter2hoursandbegantoexpresstill4hoursintheindirectinjuredareafarfromtraumatictracts.Thepositiveimmunoreactionofc-fosproteingranuleremained.ConclusionThec-fosproteinexpressioncanbeinducedbyglutamate・Neurotoxicsubstanceswereproducedinculturedmediumaftertraumaticinjury,and

6、c-fosexpressionmaybeassociatedwithneuronapoptosis・［Keywords】c-fosproteinCultureneuronGlutamateSecondarybraininjury颅脑损伤和脑缺血等应激因素可诱使C-fos原癌基因在神经元中瞬间表达，为细胞代谢活动变化的标志。由于基因的表达产物C-fos蛋口可能参与细胞内信号转导，其在继发性脑损伤中的作用近年來引起人们的普遍关注O笔者利用体外培养神经元损伤模型和免疫组化双重标记技术，动态地观察C-fos蛋口在体外培养大鼠皮层神经元中损伤后的表达，并探讨其在继发

7、性脑损伤中的作用。材料与方法一、混合培养胎鼠大脑皮层神经元方法根据Banker等［1］的方法并加以改良如下:无菌分离15-18天胎龄SD胎鼠的大脑皮层，用0.125%的胰蛋口酶消化37°C、20分钟，用含血清的培养液终止消化，制备成细胞数为5X104/ml的细胞悬液,接种于直径为35mm的培养皿中预先放置的涂有多聚赖氨酸的盖玻片上。培养液为含有15%小牛血清的DMEM（Gibco公司），置于37°C、5%C02的培养箱中培养，隔Fl换液，培养10〜12天待细胞成熟后进行实验。二、损伤方法1•谷氨酸导致的神经元损伤。根据文献［2］所述方法并稍加改良。培养10

8、~12天的皮层神经细胞，用含lmmol/L谷氨酸（Victor公司