植物生理实验 缺素培养.doc

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1、植物牛理学植物缺素培养实验报告1•实验名称：绿豆的溶液培养及缺铁培养2•实验目的植物的生长发育，除了学要充足的阳光和水分外，还需要矿质元索，否则就不能很好的生长甚至死亡，为了了解铁元素对植物生长的影响，我们采用溶液培养技术做，选用绿豆作为试验植物，做植物的营养实验，通过全素和缺铁培养的对比，探究缺铁对植物生理反映的影响。通过查阅相关资料，发现缺铁生长的植物其生理变化可通过测定叶片屮离体叶绿体光还原反应活性、培养溶液屮的PH值以及硝酸还原酶活性来表现。3•实验分析（1）试验方法及样本数：实验需要设计两个小分组，分

2、别为全素培养和缺素培养，全素为对照组，用于与缺素实验组对比生理参数，可以得出缺铁对植物生长的影响。半做对照吋，需要注意所选取的植物材料必须是长势、植株年龄、根、茎、叶等等条件都相似的个体，以排除植株本身差界所导致的实验错误。同时毎一组都应在实验开始前将所需测定的生理指标测好，Z后分析时，应该针对的是每次测定量之间的变化量。（每组取三棵植株）（2）实验内容及原理：根据所查阅的文献可知，缺铁条件下，植株叶片屮的叶绿索合成受阻，使得叶片屮，尤其是新叶屮（铁为一种不能重复利用的元索）叶绿素合成不足，进而会影响到新叶的光

3、合作用，因而选择测定离体叶绿体希尔反应的活性；同样源于叶绿素合成受阻，使得光合作用也减弱，但光合作用产生的糖类及能量能够为硝酸还原酶提供必须的电子供体和能量，因而硝酸还原酶的活力下降，因而生理指标之二，选择为硝酸还原酶活性的测定；最后由于植株在缺铁条件下，根部会分泌氢离子酸化根部环境，为高铁还原为亚铁提供比较合适的条件，因而缺铁环境下，植株的培养液环境PH会逐渐降低。（3）实验条件：植株除了所用的培养液不同外，其他条件应该都相同，当植株幼体移栽到两个乘着不同培养液的培养器皿屮，置于室温下，调节合适的空气湿度和光

4、照，将实验的误差尽量减小。1•实验步骤(1)实验仪器和材料：分析天平、培养缸、鱼眼打气泵、两桶、烧杯、移液管和烘箱材料为绿豆幼苗(2)先配制下列单盐母液:lmol/LKNO3；1molL/LCa(NO3)2；1mol/LMgSO4；1mol/LKH2PO4；0.5mol/LK2SO4；0.5mol/LCa(H2PO4)2；0.01mol/LCaS04；1mol/LMg(NO3)2,0.05mol/LEDTA-Feo配好后各置于1升试剂瓶中。0.05mol/LEDTA-Fe的配置方法是，2.78gFeSO4.7H

5、2O,加入至煮沸的Na・EDTA(含Na2-EDTA3.77g/100ml)溶液中,搅拌充分。定容到100ml.使用时再按不完全的霍格兰营养液配方配制稀释液，按每升稀释液加1毫升阿农微量元素混合液。配制稀释液时，先加入一定量的水，再按表1加各种单盐的母液，以免几种盐混合吋产生沉淀。最后用1mol/LNaOH和HCI调节至pH至5.5o表1-1不完全的霍格兰营养液(ml/L)母液处用量理完全缺铁母液ml1mol/LKNO3551mol/LCa(N03)2551mol/LMgSO4221mol/LKH2PO4110

6、.5mol/LK2SO4——0.5mol/LCa(H2PO4)20.01mol/LCaSO4——1mol/LMg(NOa)2——0.05mol/LEDTA-Fe2（3）培养观察：选区大小一致的植株，用泡沫塑料包裹茎部，插入培养缸的孔屮，每孔一株。将缸移到温室屮，经常注意管理并观察，，用蒸馆水补充缸屮失去的水分。每隔一定的吋间（一周左右，随植株大小而定）更换培养液，并测定换出溶液的PHo植株长大后要通气，同期可用鱼眼打气泵，注意记录植株的生长情况，各种元素缺乏症的症状及出现的部位。（4）运用各自的方法测出所需要的

7、生理指标A、硝酸还原酶活性的测定（离体法）实验步骤：1,酶的提取把每组3株绿豆的新叶和老叶剪下少许，洗净，用吸水纸吸干，切成小块。称取0.5g放于研钵屮，冷冻30mino然后加入适量石英砂和提取液2ml,磨成匀浆。匀浆用二层纱布过滤，在0^4°C,4000r/min冷冻离心20min,得到的上清液即为酶的粗提液。2,N02•含量的测定吸取酶粗提液0.2ml于多支试管中,分别加入0.5mlKNO3溶液，0.3mlNADH,混合后在25°C保温30min。保温结束后立即加入碱胺试剂2ml及—蔡胺试剂2ml,混合摇匀

8、,静置15min,用分光光度计（520nm）进行比色测定，记下0D值，以不加NADH的（加入0.2ml水）作为空白对照。从标准曲线上读出N02•的含量，再计算酶活力，以每小吋每克鲜重产生的N02-（ug或umol）表示。3,标准曲线的制作吸取不同质量浓度的NANO2溶液（0.5、1、2、3、4、5ug/ml）lml于试管屮，进行NO2含量的测定。以0D值为纵坐标，NANO2质量浓度为横