哺乳细胞快速扩增无酚红培养基.doc

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1、AdvCell®哺乳细胞快速扩增无酚红培养基AdvCell®哺乳细胞快速扩増无酚红培养基根据哺乳类生物细胞的生长需要，包含必需和非必需氨基酸、维生索、有机和无机化合物、激索、生长因子、微量矿物质、优选的胎牛血清以及其他补给成分。一方面，鉴于培养基无酚红特性，在细胞培养过程屮可需检测光吸收，可排除酚红的干扰；另一方面，在培养细胞之后获得的上清液可直用作美容护获品添加物。产品严格无菌，无病毒和支原体，性能稳定,使用该培养基能使干细胞在理想蓉养平衡状态下进行多代扩増而不发生分化（至少在10代以内）。★产品号CatNo:BFRM0009★产品内容名称产品号规格贮藏条件运输AdvCell®哺乳

2、细胞无酚红基本培养基AdvCell®MammalianCellCulturePhenolRed-freeBaseMediumBMSM0009500ml2-8°C避光冰袋AdvCell®胎牛血清AdvCell®FetalBovineSerumBS000125ml-20°C避光干冰AdvCell®哺乳细胞培养添加物AdvCell®MammalianCellCultureSupplementBMCS00011ml-20°C避光干冰★产品适用范围适用于贴播哺乳细胞的培养与快速扩增，细胞类型包括成纤维细胞、内皮细胞等可増殖的原代细胞,以及各种细胞系等。★使用注意事项1.完全培养基的制备：将以上

3、AdvCell®哺乳细胞快速扩增无酚红培养基（BFRM0009）屮的AdvCell®哺乳细胞无酚红基本培养基（BMSM0009）、AdvCell®胎牛血清（BS0001）、AdvCell®哺乳细胞培养添加剂（BMCS000D-f37°C解冻并迅速混合。1.完全培养基的存储：配制好的完全培养基放在4°C冰箱避光保存，并尽量在一个月内使用完。2.根据需要，培养过程中可添加一定剂量青霉索/链霉索（P/S）。★培养条件37r,5%C@,无菌恒温培养。★细胞培养【复苏】1.把完全培养基放入37°C水浴屮预热；2.从液氮屮取出哺乳细胞迅速放入37°C水浴快速解冻（解冻后不要继续孵育细胞）；3.在

4、超净台中加入5ml的完全培养基重悬细胞,1000rpm离心5min；4.弃上清，加入5ml的完全培养基重悬细胞，转移到T-25细胞培养瓶屮（带滤芯）；5.将培养瓶置于37r,5%C@的无菌培养箱屮培养；6.第二天用新鲜的完全培养基给细胞换液。【传代】1.在显微镜下观察细胞，当细胞融合度达到80%时，即可传代培养；2.37°C水浴预热培养基；3.在超净台中,弃掉T-25细胞培养瓶中的培养基,加入2mlPBS清洗,再加入1ml0.25%胰酶_EDTA消化细胞；4.在显微镜下观察到细胞变圆，有细胞开始脱离瓶壁时，即可加入5ml完全培养基终止消化；5.用移液器轻轻吹打瓶壁上剩余的细胞，并轻轻

5、吹打将细胞吹散；6.将细胞转移至15ml离心管中,1000rpm离心5min；7.弃上清，加A15-20ml的A完全培养基朿悬细胞后转入T-75细胞培养瓶中或按适当比例接种到T-25细胞培养瓶屮（确保细胞贴壁后融合度在25-50%之间）.细胞密度在1X104cells/cm2（2.5X105cells/T-25瓶），混合细胞悬液,确保细胞均匀分布;8•将培养瓶置于37C,5%CO的无菌培养箱屮培养;9.毎两天用新鲜、预热的完全培养基进行换液。