骨髓间充质干细胞无酚红无血清培养基.doc

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1、AdvCell®骨髓间充质干细胞无酚红无血清培养基AdvCell®骨體间充质干细胞无酚红无血清培养基根据细胞的生长需要，培养基包含必需和非必需氨基酸、维生索、有机和无机化合物、激索、生长因子、微量矿物质、血清替代物以及其他补给成分。菲常适用于培养哺乳类骨體间充质干细胞。••方面，鉴于培养基无酚红特性,在细胞培养过程屮若需检测光吸收，可排除酚红的干扰；另一方面，在培养细胞之后获得的上清液可直接用作美容护肤品添加物"产品严格无菌，无病毒和支原体，性能稳定，使用该培养基能使干细胞在理想营养平衡状态下进行多代扩增而不发生分化（至少

2、10代以内）。★产品号CatNO:BSFM0007★产品组成名称产品号规格贮藏条件运输AdvCell®骨髄间充质干细胞无酚红基础培养基AdvCel1BoneMarrowMesench}rmalStemCel1PhenolRed-freeBaseMediumBM0007500ml2-8°C/避光冰袋AdvCell®细胞垫AdvCell®CellpadBCP0001100ml2-8nC/避光干冰AdvCell®骨髓间充质干细胞培养添加剂AAdvCell®BoneMarrowMesenchymalStemCellCultureS

3、upplementABSFM0003A20ml-20°C/避光干冰AdvCell®骨髓间充质干细胞培养添加物BAdvCell®BoneMarrowMesenchymalStemCellCultureSupplementBBSFM0003B1ml-20°C/避光干冰★产品适用范围适用丁•人及哺乳类來源的骨髓间充质十细胞的培养。★使用注意事项1•完全培养基的制备：将以上AdvCell®骨髓间充质干细胞无酚红无血清培养基(BSFM0007)屮的AdvCell®骨髓间充质干细胞无酚红基础培养基(BM0007)、AdvCell®骨髄

4、间充质干细胞培养添加剂A(BSEM0003A)以及AdvCell®骨髄间充质干细胞培养添加物B(BSFM0003B)于37C解冻并迅速混合。2.完全培养基的存储：配制好的完全培养基放在4°C冰箱避光保存，并尽量在一个月内使用完。3.根据需要，培养过程屮可添加一定剂量青霉索/链霉索(P/S)。4.为达到最佳培养效果，所有细胞培养」IIL或培养瓶在接种细胞前用细胞梨材料(Cellpad)(BCP0001)包被过夜或室温包被2小时，包被后用吸管取走多余的AdvCell®细胞垫材料(BCP0001),再接种胞。5.如客户用自己配制

5、的冻存液冻存的细胞是用作临床治疗，应避免用卄油作为保护剂。★培养条件37°C,5张无菌恒温培养箱培养。★细胞培养【复苏】1.将配置好的完全培养基放入37°C水浴中预热5-15min：2.从液氮屮取出细胞迅速放入37°C水浴快速解冻(解冻后不要继续孵育细胞)；3.在超净台中加入5ml的完全培养基重悬细胞,1000rpm离心5min：4.弃上清,加入5ml的完全培养基重悬细胞,转移到T-25培养瓶中(带滤芯)；5.将培养瓶置于37"C,5%CO.的无菌恒温培养箱屮培养；6.第二天用新鲜的完全培养基给细胞换液。【培养】1•在显微

6、镜下观察细胞,当细胞融合度达到80%时,即可传代;2.37°C水浴预热完金培养基；3.在超净台中,弃掉T-25细胞培养瓶中的培养基,加入2mlPBS清洗,再加入1ml0.25%胰酶一EDTA消化细胞;2.在显微镜下观察到细胞变闘，有细胞开始脱离瓶壁时，即可加入5ml完全培养基终止消化；3.用移液器轻轻吹打瓶壁上剩余的细胞，并轻轻吹打将细胞吹散；4.将细胞转移到15ml离心管中,1000rpm离心5min：5.弃上淸，加入15-20ml的完全培养基朿悬细胞后转入T-75细胞培养瓶屮或按适当比例传到T-25细胞培养瓶屮。确保后

7、融合度在25-50%之间,细胞密度在1X104cells/cm2（2.5X105cells/T-25瓶），混合细胞悬液，确保细胞均匀分布；6.将细胞培养瓶置于37"C,5%C02的无菌恒温培养箱屮培养；7.每两天用新鲜、侦热的完全培养基进行换液。【冻存】1.细胞消化和计数，用朕酶对待冻存的细胞进行消化，并对细胞进行计数。2.1000rpm离心5min,去掉上淸。3.根据细胞计数的情况，加入适量的冻存液，使细胞密度在1XlOVml左右（或根据自己希望达到的细胞密度）。1.轻轻地更悬细胞（务必垂悬均匀）,将录悬的细胞按等份加入

8、到灭菌的冻存管（需提前做好标记或者贴上标签）屮，旋紧冻存管盖。5.将冻存管放入程序降温冻存盒屮，然后将冻存盒直接放入-8or2.第二天将细胞从-80°C转移到液氮屮。