间充质干细胞血清培养基.doc

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1、AdvCell®间充质干细胞血清培养基AdvCell®间充质干细胞血清培养基根据哺乳类生物干细胞的生长需要，包含必需和非必需氨基酸、维生索、有机和无机化合物、激索、生长因子、微最矿物质、胎牛血清以及其他补给成分。产品严格无菌，无病毒和支原体，性能稳定，使用该培养基能使干细胞在理想营养平衡状态下进行多代扩增而不发生分化(至少在10代以内)。★产品号CatNo:BSM0001★产品内容名称产品号规格贮藏条件运输AdvCell®间充质干细胞基础培养基AdvCell®MesenchymalStemCel

2、lBaseMediumBM0001500ml2-8°C避光冰袋AdvCell®胎牛血清AdvCell®FetdlBovineSerumBS000125ml-20"C避光干冰AdvCell®干细胞培养添加物AdvCellStemCellCultureSupplementSCM00011ml-20°C避光干冰★产品适用范围适用于人及哺乳类來源的间充质干细胞或成体干细胞的培养，包括脐带间充质干细胞、骨髓间充质干细胞及脂肪干细胞。★使用注意事项1.完全培养基的制备:将以±AdvCell®间充质干细胞血清

3、培养基(BSM0001)中的AdvCell®间充质干细胞基础培养基(BM0001).AdvCel1®胎牛血清(BS0001).AdvCell®干细胞培养添加剂(SCM0001)于37£解冻并迅速混合。2.完全培养基的存储：配制好的完全培养基放在4C冰箱避光保存，并尽杲在一个月内使用完。3.根据需要，培养过程屮可添加一定剂戢青痔索/链霉索(1>/S)o1.如客户口制的冻存液冻存的细胞是用作临床治疗，应避免用廿油作为保护剂。★培养条件37电,5%CO-.-,无菌恒温培养。★相关操作【复苏】1•将完全

4、培养基放入37°C水浴中预热：1.从液氮屮取出干细胞迅速放入37°C水浴快速解冻（解冻后不要继续孵疔细胞）；2.在超净台中加入5ml的完全培养基重悬细胞,1000rpm离心5min；3.弃上清，加入5ml的完全培养基重悬细胞，转移到T-25细胞培养瓶中（带滤芯）;4.将培养瓶置于37°C,5%C0：的无菌培养箱中培养：5.第二天用新鲜的完全培养基给细胞换液。【培养】1•在显微镜下观察细胞，当细胞融合度达到80%时，即可传代培养：2.37°C水浴预热培养基：3.在超净台中,弃掉T-25细胞培养瓶中

5、的完全培养基,加入2mlPBS清洗,再加入1ml0・25%胰酶-EDTA消化细胞：4.在显微镜下观察到细胞变圆，有细胞开始脱离瓶壁时，即可加入5ml完全培养基终止消化；况用移液器轻轻吹打瓶壁上剩余的细胞，并轻轻吹打将细胞吹散：6.将细胞转移至15ml离心管中,1000rpm离心5min：7.弃上清，加入15-20ml的完全培养基重悬细胞后转入T-75细胞培养瓶中或按适当比例接种到T-25细胞培养瓶中（确保细胞贴壁后融合度在25-50%之间），细胞密度在lX104cells/cm2（2.5X105

6、cells/T-25瓶），混合细胞悬液,确保细胞均匀分布;&将培养瓶置于37°C,5%C0,的无菌培养箱屮培养：9.毎两天用新鲜、预热的完全培养基进行换液。【冻存】1.细胞消化和计数，用胰酶对待冻存的细胞进行消化,并对细胞进行计数;2.1000rpm离心5分钟，去掉上清;1.根据细胞计数的情况，加入适最的冻存液，使细胞密度在lX107nil左右（或根据自己希望达到的细胞密度）：1.轻轻地垂悬细胞（务必重悬均匀），将重:悬的细胞按等份加入到灭菌的冻存管（需提前做好标记或者贴上标签）屮，旋紧冻存管盖

7、；2.将冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒直接放入-80°C；3.第二天将细胞从-80°C转移到液氮中。