菌种的管理和保藏.ppt

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1、2021/9/161菌种的保藏和管理杜平华2021/9/162菌种保藏的重要性菌种保藏是微生物学检验工作中的一项常规技术，菌种的科学保藏和管理直接关系到检验结果的正确性。2021/9/163菌种的来源国内或国外认可的菌种收藏机构的标准菌株，或使用与标准菌株所有相关特性等效的商业派生菌株。2021/9/164-广泛收集各种有用的微生物菌种。-选择最适宜的保藏方法。菌种保藏的中心任务2021/9/165常用菌种保藏方法菌种保藏的原则根据微生物菌种的生理、生化特性降低微生物细胞的代谢强度。2021/9/166标准菌株的复活或培养物的制备应按供应商提供的说明或按验证的方法进行。标准储备菌株-从国内、外

2、菌种收藏机构获得的标准菌株经复活并在适宜的培养基中生长后,既为标准储备菌株。菌种的保藏2021/9/167菌种的保藏抑制微生物的代谢和生长繁殖，如低温、干燥和真空等标准储备菌株经纯度和特性确认后，分装于小瓶中,可采用低温冷冻干燥，液氮储存，超低温冷冻(低于-70℃)等方法保存。2021/9/168菌种的保藏低于-70℃或低温冷冻干燥可以延长菌种的保存时间.标准储备菌株可用于制备每月或每周一次转种的工作菌株。冷冻菌株一旦解冻转种制备工作菌株后,不得重新冷冻或再次使用。2021/9/169菌种的保藏工作菌株不可代替标准菌株，标准菌株的商业衍生物仅可用作工作菌株。2021/9/1610菌种的保藏不同

3、的微生物，应根据其生物特征来选择最适宜的保藏方法，菌种的保藏方法一般分四个阶段：2021/9/1611⑴挑选特征典型的纯菌菌落。⑵确定保藏的合适菌体形态，孢子和芽孢死亡代谢作用弱，同时对恶劣环境有很强的抵抗力。⑶选择最适宜的方法。⑷定期对保藏的菌种进行鉴定，确定保藏方法的有效性。菌种的保藏2021/9/1612方法主要原理适用的微生物保藏时间特点液氮超低温保藏法超低温广泛数十年复杂、需要专门设备，有效冷冻真空干燥保藏法干燥、缺氧、低温广泛5～10年以上复杂、需要专门设备和方法，有效干燥（沙土、牛奶）保藏法干燥、无营养产孢微生物1～10年较简便，需制备沙土管，有效液体石蜡保藏法低温、缺氧广泛1年

4、以上简便琼脂斜面低温保藏法低温4℃广泛短时间简便液体冷冻保藏法液体培养基低温广泛半年以上简便一定比例甘油低温、缺氧广泛数十年以上简便瓷珠冷冻保藏法低温广泛1年以上简便菌种的保藏2021/9/1613琼脂斜面低温保藏法菌种培养基保存温度传接时间细菌一般为营养琼脂斜面培养基，或根据菌种规定选用培养基4～6℃芽孢菌3～6个月，其他细菌约1个月酵母菌霉菌琼脂或酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂斜面培养基4～6℃一般3～6个月真菌PDA琼脂或改良马丁琼脂斜面培养基4～6℃一般3～6个月2021/9/1614液体冷冻保藏法菌种保存液（2mL）保存温度保存时间金黄色葡萄球菌营养肉汤1%蛋白胨甘油水10%～40%甘油-3

5、0～-80℃半年以上或数十年枯草芽孢杆菌大肠埃希菌胆盐乳糖增菌液乙型副伤寒沙门菌铜绿假单孢杆菌生孢梭菌疱肉培养基白色念珠菌改良马丁培养基黑曲霉液体冷冻保藏法制备方法1%蛋白胨1.5ml加入甘油0.15ml,接种新鲜培养物,培养.保存条件-80℃可保存数年.2021/9/1615瓷珠菌种保存使用方法-用接种环挑取18-24小时新鲜培养物接入冻存液中-拧紧瓶盖，来回颠倒制成均匀的菌悬液-使菌悬液充分吸附在小瓷珠内外表面-将冻存管中的菌悬液吸出-使用时充分摇匀使管内瓷珠分散,取出小瓷珠，可以直接在平板培养基上划线接种或接种液体培养基,培养。保存条件室温保存12个月、-20℃保存12个月、-80℃可保

6、存24个月2021/9/16162021/9/1617二、菌种的传代和使用工作菌种的传代次数应严格控制，不得超过5代从菌种保藏中心获得的标准菌株为第0代）防止过度的传代造成菌种变异。2021/9/1618细菌的接种、分离和培养接种：将微生物的培养物、含有微生物或可能污染有微生物的样品接种到培养基上的一种操作技术。常用培养基种类斜面培养基半固体斜面培养基液体斜面培养基平板斜面培养基2021/9/16192021/9/1620接种方法涂布法划线法穿刺法直接加入法等2021/9/1621分离：为了获得纯菌种（株），采用的将细菌分离成单个细胞，使其独立分裂繁殖形成单个菌落的操技术。分离一般采用平板培养

7、基。分离方法主要有分段划线法、连续划线法、涂布分离法、倾注分离法等。2021/9/1622接种后的培养基，根据不同微生物生长条件的要求，培养基放在适宜微生物生长的环境中温度、湿度、氧气等），使其生长繁殖的过程。需气菌培养法厌氧培养法培养2021/9/1623培养后微生物的生长判断固体培养基有菌落生长或沿穿刺线扩散生长。液体培养基浑浊、菌膜、沉淀等。2021/9/1624菌种的传代和使用冻干菌种（0