《菌种保藏》PPT课件

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1、第三章发酵工业菌种的选育、保藏与复壮第一节菌种选育一、发酵工业常见微生物（一）细菌（bacteria）醋杆菌属（Acetobacter）乳杆菌属（Lactobacillus）芽孢杆菌属（Bacillus）短杆菌属（Brevibacterium）棒杆菌属（Corynebacterium）（二）放线菌（actinomyces）最大的经济价值在于产生多种抗生素链霉菌（Streptomyces）小单孢菌属（Micromonospora）蜡样芽孢杆菌乳酸杆菌（三）霉菌（mould）1.曲霉属（Aspergillus）黑

2、曲霉（A.niger）米曲霉（A.oryzae）黄曲霉（A.flavus）2.青霉属（Penicillum）桔青霉（P.citrinum）青霉桔青霉3.根霉属（Rhizopus）米根霉（R.oryzae）华根霉（R.chinensis）4.红曲霉属（Monascus）（四）酵母（yeast）酵母属（Saccharomyces）啤酒酵母（Saccharomycescerevisiae）2.假丝酵母属（Candida）产朊假丝酵母（Candidautilis）3.毕赤酵母属（Pichia）（五）其它微生物1.担子

3、菌（basidiomycetes）即菇类（mushroom）2.藻类（alga）几种菌落（六）噬菌体（phage）危害以细菌和放线菌为生产菌株的发酵工业。二、微生物发酵工业对菌种的要求1.生长迅速，目的产物产量高。2.易控制培养条件，发酵周期较短。3.抗杂菌和噬菌体的能力强。4.不易变异和退化，不产生任何有害物质和毒素。三、工业微生物菌种的选育（一）自然选育1.自然选育的目的：（1）保持菌种优良性状的稳定性（2）减少变异或降低变异退化的速度（3）获得优良菌种2.自然选育的方法采样、增殖培养、分离培养和筛选。（

4、1）采样①土样（野生性菌株）②发酵液（生产性菌株）（2）增殖培养方法：①控制培养基成分②控制培养条件③抑制不需要的菌类一般情况下采来的样品可以直接进行分离培养，但如果样品种所含菌类的含量不多，而有大量的杂菌时，可以通过选择性配制培养基（营养成分、添加抑制剂）、选择一定的培养条件（如培养温度、培养基的酸碱度）来控制。分离细菌时可加入制霉菌素或放线菌酮，抑制真菌生长。G-菌时可加入结晶紫、煌绿、胆汁。培养基呈微碱性。分离放线菌时加入植物、岩石、有机混合腐质等的浸出液作为促生因子，也可用营养贫瘠或含几丁质的琼脂培养

5、基。分离霉菌用低碳/氮比的培养基，再加入一定的抗生素；微酸性培养基。也可加入1：3000的玫瑰红（3）纯种分离①划线法：简单、快捷。②稀释法：菌落单一均匀。接种针先以火焰灭菌法灭菌步骤一划线分离法：轻触营养平板上无菌的琼脂处冷却步骤二以接种针轻触菌落，使接种针上沾有细菌。步骤三更换一个新的无菌营养平板步骤四将接种针上的细菌划于一个新的营养平板上。此为第一菌区。步骤五重复第一步骤，将接种针以火焰灭菌法灭菌，然后轻触琼脂无菌处冷却。步骤六由第五步骤的第一区中划出第二区，如右上图。步骤七重复第六以及第七步骤，由第七

6、步骤的第二区中划出第三区，如右上图。步骤八重复第六以及第七步骤，由第八步骤的第三区中划出第四区，划满剩下的空间。完成后的营养平板，如右上图。步骤九在营养平板上贴好标签，标示好接种日期、操作者姓名、菌种学名以及培养基名称。步骤十固体培养基的稀释涂抹接种法需要使用的仪器——震荡机吸取准备好欲稀释的菌液吸取充分均匀后的菌液取含有9mL无菌水之试管，将试管口过火灭菌。将菌液置入，此时试管须做记号为第一次稀释。将试管于震荡机上，使菌液混合均匀取出试管中的第一次十倍稀释菌液1mL，加入另一个新的含9mL无菌水的试管中。重

7、复此步骤直至所需要的稀释浓度。从最后稀释菌液中吸取0.1mL菌液，置入准备好的无菌琼脂内。将三角玻璃棒浸于酒精中将三角玻璃棒在火焰上燃烧（须注意勿使燃烧中的酒精滴入酒精瓶中，引起燃烧）使用玻璃棒将菌液均匀涂布开来，将培养皿置于恒温培养箱中隔天观察菌落数目，再依照稀释倍数推算出菌液浓度。（4）生产性能的测定一般采用两步法：初筛：以量为主复筛：以质为主①初筛：通过表现形态来淘汰不良菌株从菌落的大小、生长速度、颜色、孢子形成等形态特征分析判断，去除可能低产的菌落，而将高产性菌落分离、筛选出来。使琼脂平板培养基上的主

8、要菌落占90%以上。②复筛经过分离培养，在平板上出现很多单个菌落，通过菌落形态观察，选出所需菌落，然后取菌落的一半进行菌种鉴定，对于符合目的菌特性的菌落，可将之转移到试管斜面纯培养。复筛的菌种应及时保存，避免过多传代而造成新的退化。a.通过目的代谢产物的考察通过摇瓶培养进行复筛，以进一步考察菌种的生产能力的稳定性。b.传代的稳定性试验随着菌种的逐级扩大，经过多次传代产量仍保持稳定的菌种才能用于生产。