《菌种的制备和保藏》PPT课件

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1、第五章菌种的制备和保藏5.1微生物的生长、繁殖5.2固体孢子的制备5.3摇瓶种子的制备5.4菌种保藏第1节微生物的生长、繁殖一、概述生长就是有机体的细胞组分与结构在量方面的增加。单细胞微生物：生长伴随着细胞数目的增加——繁殖霉菌：细胞生长并不一定伴随着个体数目的增加——生长，而非繁殖如菌丝细胞从生长到繁殖是一个由量变到质变的过程二、细菌的繁殖裂殖是细菌最普遍、最主要的生活方式孢子的产生方式：三、放线菌的繁殖通过形成无性孢子的方式进行繁殖，也可借菌体断裂片段繁殖。1.凝聚分裂形成凝聚孢子2.横膈分裂形成

2、横膈孢子3.孢子囊形成孢囊孢子4.分生孢子5.厚壁孢子放线菌的孢子具有较强的耐干燥能力，但不耐高温，60~65oC处理10~15min即失去生活能力。1）极性生长放线菌的繁殖体以极性伸长方式进行生长通过顶端菌丝的延伸2）分化基内菌丝提供营养物质供气生菌丝生长3）孢子形成4）分枝菌丝分枝一般发生在坚硬细胞壁恢复可塑性时放线菌的生长方式四、霉菌的繁殖方式主要靠形成无性或有性孢子测定群体的增加量——群体生长五、微生物生长的测定测定个体的生长没有实际应用价值。直接法间接法1、直接法又称为全数法a）涂片染色法将

3、定体积的待测液均匀涂布在已知面积的载玻片上，经固定染色后计数b）计数器测定法细菌计数器或血球板计数器c）比浊法简便、快速2、间接法又称为活菌计数法常用平皿菌落计数法——活菌计数六、群体生长规律测定生长曲线第2节固体孢子制备固体孢子是生产种子的一种形式。一般繁殖能力强、孢子数量多的菌种可用固体孢子进罐。孢子进罐的优势：孢子处于半休眠状态，细胞内的代谢活动降到最低点；进种子罐后，所有个体都从同一水平起步生长，获得同步生长或接近同步生长。另外，进罐前若将孢子在水中浸泡数小时有利于孢子快速发芽和同步生长一、不

4、同菌种的固体孢子制备工艺四环素生产用的孢子制备在茄子瓶斜面上生长周期为3~4d，孢子总数50亿以上。斜面培养基（%）麸皮3.2(NH4)2HPO40.015MgSO40.005琼脂2.2KH2PO40.01麸皮是主要原料其质量对培养基起决定性的作用采用优质小麦，冲洗后盖湿布使充分均匀的吸水盖闷2~3h后晾干水分，磨成片状后过20目筛晾干备用2.斜面孢子培养35oC恒温培养100h。培养室内空气湿度不低于30%（30~60%）湿度不足菌丝生长缓慢，孢子繁殖数量少湿度过大则菌丝疯长，不利于产孢培养成熟的斜

5、面孢子每瓶加无菌水40~50ml制成孢子悬液利用压差接种至种子罐接种量500亿个孢子/m3。二、影响固体孢子质量的因素和控制孢子质量的方法1、孢子质量的影响因素原材料质量培养基配比培养条件（温度、pH湿度、通气量）孢子发育阶段孢子数量等2、固体孢子培养的最佳阶段固体孢子的生长繁殖可划分为三个生理阶段：营养菌丝繁殖气生菌丝繁殖分生孢子繁殖繁殖体遗传体以分生孢子进行传代和保存二、影响固体孢子质量的因素和控制孢子质量的方法菌种的遗传基因型；培养条件3、培养基组分的影响碳、氮比例无机盐菌丝生长与孢子繁殖的矛

6、盾限制营养和干燥可以促进孢子生长碳、氮过于丰富有利于菌丝的生长不利于孢子繁殖金属离子：Mg、Fe、Cu、Mn、Na以及P促进孢子形成二、影响固体孢子质量的因素和控制孢子质量的方法通气量4、通气量的控制抗生素产生菌都是好氧菌通气量均匀一致包括各级种子培养采用质量一致的棉塞（试管、茄瓶、三角瓶等）二、影响固体孢子质量的因素和控制孢子质量的方法5、培养温度的控制多数微生物能在24~37oC生长。最适温度：指细胞新陈代谢活动的适宜温度。有些菌的菌丝最适生长温度与生物合成抗生素的最适温度有所差异。可在生产的不同

7、阶段控制不同的培养温度。二、影响固体孢子质量的因素和控制孢子质量的方法6、培养室湿度的控制固体孢子培养要求适宜的空气湿度。湿度的变动会影响种子间的差异。另外需要同时考虑接种量和培养基的水分含量比如大米、小米等培养基质的含水量与菌丝生长有关。小米孢子含水量约为1：1；大米孢子含水量在24~27%为宜。二、影响固体孢子质量的因素和控制孢子质量的方法第3节摇瓶种子的制备摇瓶种子：从斜面种子接种入锥形瓶内的液体营养培养基中，在摇床上振荡培养得到的液体种子。1.配制—接种—培养—接种或保存1）菌体浓度（活菌体数

8、）2.摇瓶种子的质量标准2）菌体生长阶段对数生长后期1）培养基组成首先要求菌体生长对所有营养成分的需要，该前提下培养基组成越丰富，所获得的菌体浓度越高3.影响摇瓶种子质量的因素及其控制2）摇瓶装量影响通气效果需要结合产生菌的耗氧特性和摇床的转速3）摇床转速3.影响摇瓶种子质量的因素及其控制4）摇瓶在摇床中的位置4.孢子接入量第4节菌种保藏菌种是重要的生物资源，研究和选择良好的菌种保藏方法具有重要的意义。一、菌种保藏的目的菌种保藏的重要意义就在于尽可能保持