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《临床医学毕业论文携带nk4与il2基因真核表达载体的减毒沙门氏菌的构建.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、XX大学毕业论文携斛K1与基因真核表达载体的减毒沙门氏菌的构建2014年6月25日携带NK4与IL2基因真核表达载体的减毒沙门氏菌的构建【摘要】H的：构建携带NK4基因和IL2基因真核表达载体的减毒沙门氏菌株.方法：用基因工程方法将NK4基因和IL2基因克隆入真核表达载体pcDNA4,并进行基因测序.重组质粒经鉴定后再电转入减毒沙门氏菌Ty21a>
2、',通过PCR和酶切鉴定，并对构建的重组减毒沙门氏菌进行体外稳定性观察.结果：经PCR和卿切证实，构建了分别含NK4基因和IL2基因的重组真核表达质粒pcDNA4NK4和pcDNA4IL2,并将他们
3、成功导入减毒沙门氏菌Ty21a屮.稳定性实验结果表明该重组菌株在体外能稳定地繁殖、生长和传代.结论：成功构建携带NK4基因和IL2基因真核表达载体的减毒沙门氏菌株，为探索制备携带NK4和IL2基因的肿瘤减毒活疫苗萸定了基础.【关键词】NK4;基因；白细胞介素2；沙门菌属；疫苗，减毒【Abstract]AIM:ToconstructtworecombinantattenuatedSalmonellatyphimuriumstrainscarryingNK4andIL2geneeukaryoticexpressionvector.METHODS:N
4、K4geneandIL2genewereobtainedbyPCR,thenclonedintoeukaryoticexpressionvectorpcDNA4.Therecombinantswereidentified,andtransformedintoattenuatedSalmonellatyphimuriumstrainTy21a,andthecloneswerescreenedbyPCRandrestrictionenzymedigestion.Thestabilityofthetworecombinantattenuatedsal
5、monellatyphimuriumstrainswasevaluated.RESULTS:ConfirmedbyPCRandrestrictionenzymedigestion,recombinanteukaryoticexpressionplasmidpcDNA4NK4andplasmidpcDNA4IL2wereconstructedsuccessfully,andthenintroducedintoanattenuatedSalmonellatyphimuriumTy21a.Therecombinantstrainsstablyrepr
6、oduced,grewandpassagedinvitro.CONCLUSION:TherecombinantattenuatedSalmonellatyphimuriumstrainscarryingplasmidpcDNA4NK4andplasmidpcDNA4IL2canbesuccessfullyconstructedandidentified,anditwillhelptodevelopatumorexpressingrecombinantlivevaccinecarryingNK4andIL2.【Keywords】NK4;genes
7、;interleukin2;Salmonella;vaccines,attenuated0引言肝细胞生长因子（hepatocytegrowthfactor,HGF）是由间质细胞产生的多功能细胞因子，具有强促分裂、组织形成、诱导上皮细胞迁移，侵袭及诱导血管生成等作用，这些都有利于肿瘤组织的发生与发展［1］・1997年Date等［2］用胰弹性蛋白酶对重组人HGF进行消化裂解，发现了一种新的全面描抗HGF生物活性功能的拈抗剂NK4.NK4作为HGF的拈抗剂能显著抑制肿瘤细胞的生长、增殖和转移，在肿瘤基因治疗小有潜在的应用前景.白细胞介素2（inter
8、leukin2,IL2）又称T细胞生长因子，是机体免疫调节屮的重要细胞因子之一，可通过提高自然杀伤细胞与LAK细胞活性，增强细胞毒性T细胞（cytotoxictlymphocyte,CTL）对肿瘤细胞的杀伤作用，并激活肿瘤侵润淋巴细胞从而诱导机体的抗肿瘤免疫反应，使肿瘤生长停止或瘤体减小［3］.随着分子生物学的发展，IL2基因已经成为肿瘤基因治疗的热点.其在乳腺癌和黑色索瘤的I期临床实验屮取得了明显的疗效［4］.木实验我们将构建含NK4基因与IL2基因的重组真核表达载体（pcDNA4NK4和pcDNA4IL2）,并将其导入减毒沙门氏菌Ty21a
9、屮，为其进一步应用提供实验依据.1材料和方法1.1材料PCAGGS/hNK4质粒（美国Davis博士惠赠）,PBV220IL2质粒（北京大学医学院惠赠
