临床医学毕业论文组织块法培养兔主动脉平滑肌细胞.doc

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1、XX大学毕业论文组织块法培养兔主动脉平滑肌细胞2014年6月25日组织块法培养兔主动脉平滑肌细胞作者：王青青，李伟宏，常志杰，焦金菊【摘要】H的探讨培养兔主动脉平滑肌细胞的方法，为心血管疾病的病因机制研究提供有用的体外模型。方法采用组织块贴壁、反转干涸方法培养兔主动脉平滑肌细胞并传代。倒置显微镜下进行形态学观察及免疫细胞化学鉴定。结果成功培养兔血管平滑肌细胞并传代。倒置显微镜下细胞呈典型的“峰■谷”状。免疫细胞化学染色呈棕黄色，均呈阳性表达，胞浆内可见纵行排列肌丝。结论利用组织块贴壁、反转干涸方法成功进行兔主动脉平滑肌细胞原代培养，具有简便易行、培养周期短、

2、纯度高等优点，是心血管疾病良好的体外研究模型。【关键词】血管平滑肌细胞；原代培养；兔Abstrct:ObjectiveTodiscussthemethodforprimarycultureofrabbitarterialsmoothmusclecells.Toprovideusefulvitromodelfortheetiopathogenisisofcardiacvasculardiseases.MethodsRabbitarterialsmoothmusclecellswereculturedwithtissuecxplantsadherentandba

3、cktorolldepletivemethodandcouldbepassagcd.Thcformofrabbitarterialsmoothmusclecellswereobservedunderinvertedphasecontrastmicroscopeandwereidentifiedwiththemethodofimmunocytochemistry.ResultsRabbitarterialsmoothmusclecellswereculturedsuccessfullywithtissuecxplantsadherentandbacktorol

4、ldepletivemethodandcouldbepassagcd.Undcrinvertedphasecontrastmicroscope,thegrowthofthecellsshowedatypicalhill-and-vallypattem.Afterimmunocytochemistrystaining^allthecellscytoplasmwerestainedandpositive.Lotsofstainedbuflyactinfilamentbundleswereobservedincellcytoplasm.ConclusionsThe

5、culturetecheniqueoftissueexplantsadherentmethodhastheadvantagesofeasytooperate,highefficiencytoobtainVSMCsinashortercycletime,highpurityandsoon.Thcyarcgoodvitromodelofcardiacvasculardiseases.Keywords:VSMCs;primaryculture;rabbit近年来，越来越多的证据表明血管平滑肌细胞（vascularsmoothmusclecells,VSMCs）增殖

6、在冠状动脉粥样破化、高血压病等疾病的发生发展屮起重要作用。因此，体外培养VSMCs为探索临床治疗干预途径提供了一个良好的实验对象。门前，培养大鼠、小鼠VSMCs的报道较多，而培养兔VSMCs的报道相对较少，木实验在参照文献［1-3］的基础上,结合自已的一些经验，成功培养兔主动脉平滑肌细胞并传代。1材料和方法1.1材料1.1.1实验动物健康曰本大耳兔，雌性，1.0〜1.5kg,由辽宁医学院实验动物中心提供。1.1.2培养材料和试剂高糖DMEM培养液，1:250胰蛋白卿（美国sigma公司），胎牛血清（FBS,杭州四季青生物科技责任公司），小鼠抗兔a-平滑肌肌动

7、蛋白单克隆抗体，即用型SABC试剂盒（武汉博士得生物工程有限公司），一次性培养瓶（美国Coming）o1.2方法1.2.1获取兔主动脉平滑肌细胞取健康日本大耳兔1只，空气栓塞致死，无菌条件下取出主动脉，放入装有培养液的培养皿屮，PBS反复清洗血迹，干净后用小蹑子剥除外膜纤维结缔组织，用眼科剪将血管纵行剪开，平铺在培养U1L>P,使内表面朝上，用眼科弯银刮除血管内膜，以去除内皮细胞，剩余血管屮膜组织透明、较薄、韧性好,浸泡于PBS屮并冲洗干净，而后移入10mL小瓶屮，加入1mL培养液，剪成约1mm3的组织块，将其移入培养瓶，摆布均匀,翻转培养瓶，使瓶底向上，组

8、织块位于培养瓶上方，加入4〜5mL含20%FBS的D