欢迎来到天天文库
浏览记录
ID:52603374
大小:71.50 KB
页数:6页
时间:2020-03-29
《临床医学毕业论文组织块法培养兔主动脉平滑肌细胞.doc》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、XX大学毕业论文组织块法培养兔主动脉平滑肌细胞2014年6月25日组织块法培养兔主动脉平滑肌细胞作者:王青青,李伟宏,常志杰,焦金菊【摘要】H的探讨培养兔主动脉平滑肌细胞的方法,为心血管疾病的病因机制研究提供有用的体外模型。方法采用组织块贴壁、反转干涸方法培养兔主动脉平滑肌细胞并传代。倒置显微镜下进行形态学观察及免疫细胞化学鉴定。结果成功培养兔血管平滑肌细胞并传代。倒置显微镜下细胞呈典型的“峰■谷”状。免疫细胞化学染色呈棕黄色,均呈阳性表达,胞浆内可见纵行排列肌丝。结论利用组织块贴壁、反转干涸方法成功进行兔主动脉平滑肌细胞原代培养,具有简便易行、培养周期短、
2、纯度高等优点,是心血管疾病良好的体外研究模型。【关键词】血管平滑肌细胞;原代培养;兔Abstrct:ObjectiveTodiscussthemethodforprimarycultureofrabbitarterialsmoothmusclecells.Toprovideusefulvitromodelfortheetiopathogenisisofcardiacvasculardiseases.MethodsRabbitarterialsmoothmusclecellswereculturedwithtissuecxplantsadherentandba
3、cktorolldepletivemethodandcouldbepassagcd.Thcformofrabbitarterialsmoothmusclecellswereobservedunderinvertedphasecontrastmicroscopeandwereidentifiedwiththemethodofimmunocytochemistry.ResultsRabbitarterialsmoothmusclecellswereculturedsuccessfullywithtissuecxplantsadherentandbacktorol
4、ldepletivemethodandcouldbepassagcd.Undcrinvertedphasecontrastmicroscope,thegrowthofthecellsshowedatypicalhill-and-vallypattem.Afterimmunocytochemistrystaining^allthecellscytoplasmwerestainedandpositive.Lotsofstainedbuflyactinfilamentbundleswereobservedincellcytoplasm.ConclusionsThe
5、culturetecheniqueoftissueexplantsadherentmethodhastheadvantagesofeasytooperate,highefficiencytoobtainVSMCsinashortercycletime,highpurityandsoon.Thcyarcgoodvitromodelofcardiacvasculardiseases.Keywords:VSMCs;primaryculture;rabbit近年来,越来越多的证据表明血管平滑肌细胞(vascularsmoothmusclecells,VSMCs)增殖
6、在冠状动脉粥样破化、高血压病等疾病的发生发展屮起重要作用。因此,体外培养VSMCs为探索临床治疗干预途径提供了一个良好的实验对象。门前,培养大鼠、小鼠VSMCs的报道较多,而培养兔VSMCs的报道相对较少,木实验在参照文献[1-3]的基础上,结合自已的一些经验,成功培养兔主动脉平滑肌细胞并传代。1材料和方法1.1材料1.1.1实验动物健康曰本大耳兔,雌性,1.0〜1.5kg,由辽宁医学院实验动物中心提供。1.1.2培养材料和试剂高糖DMEM培养液,1:250胰蛋白卿(美国sigma公司),胎牛血清(FBS,杭州四季青生物科技责任公司),小鼠抗兔a-平滑肌肌动
7、蛋白单克隆抗体,即用型SABC试剂盒(武汉博士得生物工程有限公司),一次性培养瓶(美国Coming)o1.2方法1.2.1获取兔主动脉平滑肌细胞取健康日本大耳兔1只,空气栓塞致死,无菌条件下取出主动脉,放入装有培养液的培养皿屮,PBS反复清洗血迹,干净后用小蹑子剥除外膜纤维结缔组织,用眼科剪将血管纵行剪开,平铺在培养U1L>P,使内表面朝上,用眼科弯银刮除血管内膜,以去除内皮细胞,剩余血管屮膜组织透明、较薄、韧性好,浸泡于PBS屮并冲洗干净,而后移入10mL小瓶屮,加入1mL培养液,剪成约1mm3的组织块,将其移入培养瓶,摆布均匀,翻转培养瓶,使瓶底向上,组
8、织块位于培养瓶上方,加入4〜5mL含20%FBS的D
此文档下载收益归作者所有