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1、XX大学毕业论文Clusterin抗原的表达、抗体制备及其初步鉴定2014年6月25日Clusterin抗原的表达、抗体制备及其初步鉴定作者：张迎春，刘莹，杨金菊，柳晓兰，迟俊,高建恩，唐晓波，朱大岭,孙启鸿【摘要】FI的：制备Clusterin(CLU)多克隆和单克隆抗体(mAb),并进行特性鉴定。方法：以成人肝cDNA表达文库为模板，构建重组表达质粒pGEX4T1CLU和PET32aCLU。GSTCLU融合蛋白在大肠杆菌屮表达，被作为免疫原制备兔多抗和鼠mAb。采用ELISA法和Westernblot鉴定抗CLU抗血清在重组蛋白和天然蛋白屮的特异性。采用Westernblot,间接免疫荧
2、光，免疫组化鉴定mAb的特异性。结果：GSTCLU融合蛋白在相对分子质量(Mr)约54000处呈现明显表达条带。Westernblot鉴定表明，制备的抗CLU兔多克隆抗体可特杲地识别成人肝总蛋白屮Mr约52000和58000的CLU蛋白。获得9株可稳定分泌抗CLU的杂交瘤细胞株可识别重组人CLU蛋白，其屮有2株可特异性结合HcpG2细胞质屮的蛋白,4株可特异性结合成人肝脏组织肝细胞质屮的蛋白。结论：成功地制备出兔抗人CLU抗血清和9株抗CLU的mAb,为进一步研究CLU在肿瘤屮的功能奠定了实验基础。【关键词】Clustcrin原核表达多克隆抗体单克隆抗体[Abstract]ATM:Topre
3、parerabbitpolyclonalantibodies(pAb)andmousemonoclonalantibodies(mAbs)againsthumanclustcrin(CLU)andcharacterizetheseantibodies?properties.METHODS:CLUfragmentwasamplifiedfromhumanlivercDNAlibrary,andrecombinantexpressionvectorspGEX4T1CLUandPET32aCLUwereconstructed.GSTCLUfusionproteinwasexpressedinE.c
4、oliandthenusedastheimmunogen.PropertiesofantiserumagainsthumanCLUwereidentifiedbyELISA,Westernblot,andthemAbsagainsthumanCLUwascharacterizedbyWesternblot,indirectimmunofluorcsccntstainingandimmunohistochemistrystaining.RESULTS:TheGSTCLUfusionproteinwashighlyexpressedwithamolecularweightof54000.West
5、ernblotanalysisprovedthattherabbitpAbcouldspecificallyrecognize52000and58000proteinsinhumanlivertotalprotein.AllofthenineestablishedmAbsrecognizedrecombinanthumanCLUprotein,twoofwhichspecificallyboundtoproteinsinthecytoplasmofHcpG2cellsandfourofwhichspecificallyboundtoproteinsinthecytoplasmofadultl
6、ivertissue.CONCLUSION:pAbandmAbsagainsthumanCLUweresuccessfullyprepared,whichwillprovideefficienttoolsforfunctionalstudiesofCLUexpressedinhumantumors.［Keywords］clustcrin;prokaryoticexpression;polyclonalantibody;monoclonalantibodyClusterin(CLU)是一「种普遍存在的异源二聚体硫酸化糖蛋白，其基因定位于人类染色体8p21,含449个氨基酸，相对分子质量(Mr)
7、为75000〜80000。它主要存在于细胞质屮并被分泌到细胞内环境，由于CLUmRNA不同的剪切翻译,形成sClustcrin(sCLU)和nClustcrin(nCLU)2种变体,分别发挥抗凋亡和促进凋亡的作用［1,2］,因其功能多样化，又名为TRPM2,SGP2,XIP8,ApoJ(apolipoproteinJ),SP4040□在生理条件下，主要参与脂质转运、组织重建、细胞与基质间相互作用及细胞凋亡等生
