dpvgj基因主要抗原域表达及抗体制备

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1、万方数据论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行研究工作所取得的成果。尽我所知，除了文中特另JJ)JD以标注和致谢的地方外，学位论文中不包含其他个人或集体己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川I农业大学或其它教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：饼小伊欠勃节年<月尼日关于论文使用授权的声明本人完全了解四川I农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或

2、扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意四川I农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。口本论文不保密。口本论文保密，在～年解密后适用本授权。(请在以上口内划“√”)研究生签名：觏小政导师签名：伽／≯年∥月／2曰年月日』螂螋炒万方数据中文手两要本论文对鸭瘟病毒(DPV)gJ基因进行了生物信息学分析，原核表达了gJ基因．去跨膜区和信号肽的截段基因gJ(M)，并制各了截段基因表达蛋白的多克隆抗体，主要内容可归纳如下：1．鸭瘟病毒gJ基因的分子特性分析鸭瘟病毒gJ基因大小为1620bp，编码539个氨基酸，理论等电点为6．037。鸭瘟病毒gJ蛋白在其N

3、端有信号肽，C端有一个跨膜区，阈值为0．5时共有32个潜在的磷酸化位点，这些位点包括15个丝氨酸位点，9个苏氨酸位点，8个酪氨酸预测位点。通过对gJ蛋白做二级结构预测，结果表明无规则卷曲的氨基酸含量高(占50．65％)，为蛋白抗原表位提供了良好的空间。其ORF含62个稀有密码子，含量占33．3％，包括9个连续的稀有密码子串。2．鸭瘟病毒酣截段基因的原核表达及多克隆抗体的制备成功构建了酣全基因和酣截段基因的重组原核表达质粒pET-32a(+)一妙和pET．32a(+)一gJ(M)，并将其转化入大肠杆菌BL21(DE3)菌中。IPTG诱导结果表明gJ全基因不能有效表达，酣截段

4、基因高效表达，得到与预期蛋白大小一致的约为30kDa的不可溶性蛋白，免疫印迹结果表明表达蛋白可与兔抗DPV血清发生特异性反应。对诱导表达条件进行优化得出最佳表达条件为3no．1mmol／LIPTG，在30。C水浴条件下诱导5h。纯化的重组蛋白免疫兔子制备兔抗gJ(M)抗体，琼脂糖扩散试验表明其效价为1：32。关键词鸭瘟病毒；砂基因；原核表达；抗体制备万方数据AbstractTheProkaryoticExpression，PolyclonalAntibodyPreparationofDPVgJAntigenProtein．Do．ma．inHuXiaohuan(Preven

5、tiveVeterinaryMedicine)DirectedbyPro．ChengAnchunandPro．WangMingshuThebioinformaticsfeatureoftheDPVgJgenewasstudiedinthisessay．Weexpressedthedes。·transmembraneanddes-·signalpeptidedomainofgJgenesuccessfullyandproducedthepolyclonalantibody．Theresultsshowedthat：1．MolecularcharaeterizationofD

6、PVgJgeneTheDPVgJgenecontained1620basicgroups，whichencodedapolypeptideof539aminoacidresidues，anditsisoelectricpointwas6．037．TheDPVgJproteinhadasignalpeptideandtransmembranedomainsatitsNterminusandCterminus，separately．Thesequencecontained32possiblesitesforphosphorylation，15onserine，9onthreo

7、nine，and8ontyrosineresidues，whenthethresholdwasdefinedas0．5．Secondarystructurepredictionshowedthatitcontained50．65％randomcoil．whichprovidedafavourablespaceforantigenepitopeofgJ(M)．Inaddition，ThegJgeneORFhad62rarecodonswhichoccupied33．3％．andthesequencecontainedninera