RD细胞培养操作细则.doc

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1、RD细胞培养操作细则1•目的根据世界卫生组织脊髓灰质炎病毒检验手册，对RD细胞培养作必要的细化和补充，以规范本屮心对RD细胞培养的操作方法。2•适用范围本操作细则适用于RD细胞培养。3.职责检测人员：负责按照本操作细则对RD细胞进行•传代培养。复核人员：负责对RD细胞进行传代培养操作是否规范及细胞生长状态进行复核。科室负责人：负责对科室综合管理。4.方法原理RD细胞培养采用胰酶与PBS联合应用消化细胞，分瓶/管传代。5.检验依据5.1《内蒙古自治区疾病预防控制屮心质量管理手册》6.细胞状态RD细胞己生长良好，并已长成单层。7.设备

2、和材料或试剂CO?培养箱、倒置显微镜、0.25%胰酶、PBS、生长液、培养瓶、吹打管。8.细胞培养条件温度36.5°C,CO2浓度5%09・操作步骤打开瓶盖，倒去培养液加入5mlPBS,轻摇三次，倒去PBS加入3mlPBS和lmlO.25%胰酶，覆盖细胞层平放于36.5C温箱，作用约1〜2分钟,倒去消化液，细胞面朝上，H36.5°C温箱约5分钟轻振或拍打细胞瓶，使细胞瓶舉完全脱落成悬浮状态加入40〜50ml生长液，用吹打管沿瓶壁吹打，使细胞充分混匀用吸管吸出细胞悬液分装成每瓶10ml（即1:4或1:5传代）川不脱色的记号笔作好标记

3、（RD、代数、传代日期）平放于36・5°C温箱培养（一般三天左右长成单层）做好细胞传代记录10・细胞生长状态观察于RD细胞传代第二天，将细胞瓶置倒置显微镜上，观察其生长状态，并做好记录。11・支持性文件WHO：脊髓灰质炎病毒检验手册12.质量记录12.1仪器设备使川登记表12.2细胞传代记录13・附录附录A细胞传代、冻存、复苏记录表14.操作注意事项14.1细胞传代操作应于实验室的T•净区进行。14.2严格的无菌操作。14・3不同种类细胞使用同一超净台时，应在做完一种细胞厉，经紫外线消毒后再进行另一种细胞的传代。细胞英文名称RD细

4、胞屮文名人恶性胚胎横纹肌肉瘤细胞形态特性梭型和大的多核细胞生长特性贴壁生长特征特性该细胞可能是TE671的母系。可产生肌红蛋白和肌球IfiAATPase,可用作病焉检测。培养基DMEM-H:DulbeccozsModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)血清IO%FBS其它因子无传代方法1:2〜1:4传代，3〜4天换液1次。传代情况C3冻存条件基础培养基+5%DMSO+20%FBS支原体检测阴性同工酶染色体细工CRO