重组片段地转化及克隆和筛选.pdf

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1、中国试剂网3.13.11.14重组片段的转化及克隆和筛选一、目的与原理转化是指以质粒DNA或以它为载体构建的重组子导入细菌的过程。转化技术在基因工程领域中占有极重要的地位。目前用得较多的转化技术为将人工构建的重组质粒到如受体细胞，使重组质粒在受体细胞中稳定地复制和表达。二、材料和方法1.材料：大肠杆菌2.仪器：离心机，恒温摇床，恒温水浴，超净工作台，冰柜3.试剂LB培养基;0.1MmMCaCl2;0.1MMgCl2;TFB：10mMMES（pH6.3）,45mMMnCl2,10mMCaCl2,100mMKCl三、操作步骤1

2、.感受态细胞融化（在手心）2.加入溶于TE的待转化外源DNA，冰浴30min。3.42℃热冲击2min。4.冰上2min。5.加入0.4mlLB液体培养基，37℃保温摇床45min6.取0.2ml菌悬液涂布在含氨苄青霉素、IPTG、X-gal培养基上，37℃培养。四、实验结果及分析：培养皿上有白色菌落和兰色菌落，但兰色菌落数量很少。由于受体细胞本身的菌落为兰色，所以白色菌落说明转化成功；兰色应为转化不成功。但是由于转化的质粒经过了酶切和连接，若是在原酶切位点的连接进行的转化，菌落为白色；若为酶切去一段DNA的的连接质粒进行

3、的转化，菌落为兰色（说明在酶切上成功，连接上也成功，转化上也成功）。五、注意事项关键要严格控制热激时间，超过2min，则转化会失败。