短暂性MCAO大鼠注射天麻素具有神经保护作用【大学临床医学毕业论文设计，精选】.doc

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1、临床医学论文■短暂性MCAO大鼠注射天麻素具有神经保护作用作者：杨杰，赵朝华，宗长宏，张峰昌，陈国敏【摘要】冃的：探讨天麻素对缺血性脑损伤的神经保护作用.方法：通过线栓技术闭塞大脑屮动脉(MCAO)2h诱导建立暂时性局部脑缺血模型，SD大鼠腹腔内连续注射天麻素3d・采用TUNEL染色测定缺血边缘区细胞凋亡；免疫组织化学染色观测S100/3和iNOS蛋白表达.结果：MCAO后3d，天麻素组大鼠脑梗死边缘区TUNAL+细胞数目明显减少(Pv0・05)；S100B和iNOS+细胞数目下降(P<0.05).结论：天麻素可以抑制脑缺

2、血诱导的细胞凋亡，具有神经保护作用；S100/3和iNOS蛋白表达的下调可能涉及到天麻索的抗细胞凋亡作用.【关键词】天麻素；脑缺血；细胞凋亡；S100/3；iNOS0引言脑血管疾病的病理生理过程是非常复杂的涉及到兴奋性毒性一氧化氮(NO)蓄积、钙超载、氧自由基损伤、能量代谢障碍、凋亡、胶质细胞异常等.脑缺血后神经元死亡存在坏死和凋亡两种方式.抑制凋亡过程，挽救缺血性半暗带内的神经元，防止半暗区向梗塞区的发展逐渐成为脑缺血保护剂硏究的热点〔1〕•硏究发现天麻素的神经保护作用与抑制细胞凋有关〔2〕・本实验的目的是通过硏究天麻素

3、对暂时性大脑中动脉闭塞(MCAO)大鼠的细胞凋亡和S100/?以及iNOS蛋白表达的影响，探讨天麻索的神经保护作用机制.1材料和方法1・1材料健康雄性SpragueDawley（SD）大鼠（由西安交通大学医学院动物中心提供），体质量240〜280g.实验前常规环境分笼饲养7d・参考longa等（1989）描述的管腔内线栓技术闭塞大脑中动脉制作暂时性局部脑缺血.简耍过程，大鼠经水合氯醛（300mg/kg）腹腔注射麻醉，分离暴露右侧颈部血管，40缝合线结扎颈外动脉和颈总动脉，将一头端加热呈光滑球形并覆有多聚赖氨酸（sigma）

4、的30单股尼龙线（购于宁波医用缝针厂）缓慢插入颈内动脉至感到有轻微阻力为止（约距颈总动脉分义处17〜18mm）,闭塞MCA起始部.手术期间使用电热毯维持大鼠体温在36.5〜37.5°C・大鼠拔线后分为天麻素组5二4）和对照组5二4）.天麻索组大鼠按100mg/kg腹腔内每日注射天麻索注射液（中山市三才医药集团有限公司）1次，连续3d.对照组大鼠注射同体积的生理盐水.所有大鼠放回笼中常规喂养.1・2方法1.2.1神经学的评价大鼠MACO后2h参照Bcdcrson等（1986）方法进行神经功能损伤程度的评定.即0级：行为正常；

5、1级：提尾悬空左侧前肢屈曲，肩内收；2级：抵抗对侧推力下降，伴前肢屈曲；3级：自发性侧向旋转或运动，伴抵抗对侧推力下降和前肢屈曲.将评定为3级的大鼠视为成功MCAO模型，用于后续实验.成功MCAO模型大鼠经水合氯醛麻醉后，轻轻抽出尼龙线，建立MCA再循环・1.2.2TUNEL和免疫组织化学染色及分析天麻素组和对照组大鼠于MCAO后3d水合氯醛深麻，常规灌注、取脑、固定、石蜡包埋，冠状位切片，片厚6“m，用于TUNEL染色、S100/3和iNOS免疫组织化学染色.1.2.3细胞计数每只大鼠各取4张TUNEL,S100/3和i

6、NOS染色切片，通过MolicImagesAdvanceed3.0图像分析系统?使用x20物镜在缺血边缘区选取4个（640x480像素）等面积视野区，计数TUNEL,S100仔和iNOS阳性细胞.统计学处理：计量数据均用x±s表示，两组间比较采用t检验，P<0.05为有统计学差异.2结果2.1缺血边缘区TNNEL阳性细胞的形态和数目变化MCAO后3d在缺血侧半球可见许多TUNEL阳性细胞环绕在梗死区周围，散在分布于正常细胞中（图1）・而天麻素组缺血边缘区凋亡细胞数目（18・42±2.43）较对照组（23・53±3・36）减

7、少（PvO.05）・图1MCAO大鼠（A）和天麻素治疗MCAO大鼠（B）缺血边缘区TUNEL免疫反应阳性细胞TUNELx2002.2缺血边缘区S100B阳性细胞的形态和数目变化免疫组织化学染色显示，对照组大鼠MCAO后3dS100/3阳性细胞在缺血中心区消失，在缺血边缘区出现人量胞体肥人呈圆形的S100B阳性细胞，突起较多且长.天麻素治疗组大鼠在缺血边缘区也可见许多的S100/S阳性细胞，但数冃较少（图2）.S100/3阳性细胞定量分析显示对照组组为18.92±2.37，天麻素组为14.64±3・11，天麻素组少于对照组，

8、差异有统计学意义（PvO.05）.图2MCA0大鼠（A）和天麻素治疗MCAO大鼠（B）缺血边缘区S100/3免疫反应阳性细胞SABCx2002.3缺血边缘区iNOS阳性细胞的分布和数日变化免疫组织化学染色（图3）显示，各组大鼠MCAO后3d在缺血侧脑可见许多iNOS阳性细胞，主要集中于梗死区周围.在天麻