游离亚油酸对胰腺腺泡细胞的影响及其机制的探讨.doc

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1、游离亚油酸对胰腺腺泡细胞的影响及其机制的探讨作者：王亚军孙家邦李非孙海晨【摘要】目的探讨游离亚油酸对胰腺腺泡细胞的影响及其可能的机制。方法分离胰腺腺泡细胞，分别与0・1、0.5、l.Onunol/L亚油酸共同孵育30、60、90min,测定细胞的LDH释放率，DNA片段梯度分析腺泡细胞凋亡，流式细胞仪测定细胞凋亡率，Westernblot检测腺泡细胞PKC的膜转位，激光共聚焦测定细胞内钙的变化。结果腺泡细胞与亚油酸共同孵育后，台盼蓝染色显示存在细胞损伤，LDH释放率与亚油酸呈时间和剂量依赖关系。细胞总DNA凝胶电泳结果显示1.0mmol/L亚油酸可出现DNA梯状条带，证明存在

2、细胞凋亡。同时，腺泡细胞凋亡率及PKC的膜转位率，均与亚油酸呈剂量和时间依赖关系。另外，钙离子是参与细胞损伤和PKC激活的因子之一，采用激光共聚焦方法检测腺泡细胞内钙浓度，发现其升高与亚油酸呈浓度依赖性。结论亚油酸对胰腺腺泡细胞损伤存在剂量和时间依赖关系。游离亚油酸刺激腺泡细胞内钙升高和活化PKC诱导细胞凋亡可能是高脂血症性胰腺炎的发病机制之一。【关键词】胰腺腺泡细胞游离亚油酸细胞凋亡蛋白激酶C细胞内钙离子Explorationonfreefattyacidaffectingpancreaticacinarcel1anditspossiblemechanismWANGYaju

3、n,SUNJiabang,LIFei,SUNHaichen・DepartmentofGeneralSurgery,XuanwuHospitaiofCapitaiUniversityofMedicalScience,Beijingl00053,China【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheeffectsoffreefattyacidonpancfeaticacinarcel1andexplorepossiblemechanism・MethodsPancreaticacinarcellsfromadultratswereincubatedwith

4、linoleicacidatconcentrationsof0・lmmol/L,0・5mmol/Land1・0nimol/Lfor30,60and90minutesrespectivelytomeasuretheLDHreleaserateofacinarcells・DNAladderana1ysiswasusedtoanalyzeapoptosisofacinarcelIs,flowcytometrytodetermineapoptosisrate,WesternblottodetectPKCmembranetranslocationandlaserscanningconf

5、ocalmicroscopy(LSCM)toobserveintracellularealciumchanges・ResultsAfterincubationwithlinoleicacid,pa.ncreaticacinarcellsstainedwithtrypanblueweredama.ged,withLDHreleaserateattimeanddosedependentfashionwithl1noleicacid・DNA1adderwasformedbyagarosegelelectrophoresiswhenacinarcellswereincubatedwi

6、th1.Ommol/Llinoleicacid,asprovedapoptosisofacinarcel1s.Also,acinarcel1apoptosisrateandPKCmembranetranslocationlevelwererelatedwithlinoleicacidatatimeanddosedependentfashion.Inaddition,intracellularcalciumwasoneofthefactorsleadingtocel1injurysnd卩KCactivation.LSCMshowedthattherisingofintracel

7、1ularealciumexistedatadosedependentfashionwithlinoleicacid・ConclusionsLinoleicaciddamagingacinarcel1isdependentlyrelatedtodoseandtime・Freefattyacidstimulatingincreaseofintracellularcalciuina.nda.ctivationofPKCinducingapoptosisisoneofpathogeneticmechanism