精氨酸对急性胰腺炎大鼠胰腺腺泡细胞凋亡的影响

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1、精氨酸对急性胰腺炎大鼠胰腺腺泡细胞凋亡的影响【摘要】目的:探讨左旋精氨酸与急性胰腺炎(AP)大鼠胰腺腺泡细胞凋亡的关系.方法:以蛙皮素制造AP模型，观察不同剂量LArg治疗AP大鼠后，胰腺组织中一氧化氮合酶（NOS）活性、一氧化氮(NO)的含量、胰腺腺泡细胞凋亡及胰腺组织病理改变.结果:AP胰腺组织中NOS活性较正常胰腺组织中升高，而此时胰腺组织NO浓度反而降低，低剂量LArg（75,150mg/kg）使胰腺组织中NO浓度升高致接近正常组水平，促进了胰腺腺泡细胞凋亡，减轻胰腺病理损害；高LArg剂量（1200,2400mg/kg）

2、，胰腺组织中NO浓度升高超出正常组，胰腺腺泡细胞凋亡减少，胰腺病理损害加重.结论:LArg对AP的的双重作用与NO的生物活性有关.小剂量可通过诱导胰腺腺泡细胞凋亡,而起保护作用,大剂量则有害.【关键词】胰腺炎细胞凋亡左旋精氨酸　　0引言　　近年来人们注意到轻症急性胰腺炎(AP)的胰腺腺泡细胞中存在着较多的细胞凋亡,而急性坏死型胰腺炎(ＡＮＰ)却很少出现细胞凋亡.这提示细胞凋亡在ＡＰ发展成ＡＮＰ的发病机制和发展过程中起着一定作用［1］.精氨酸（Arg）及其在体内的代谢产物NO，对AP起一定的保护作用，可能是治疗AP的一条新途径［2-3］

3、.一氧化氮（NO）作为一种信息分子参与了多种组织和细胞的凋亡过程，其生物作用随浓度变化而截然不同.为了探讨NO的供体左旋精氨酸（LArg）治疗AP的作用，我们观察了倍数剂量LArg治疗AP大鼠后，胰腺组织中NOS活性、NO的含量、胰腺腺泡细胞凋亡及胰腺组织病理的变化.　　1材料和方法　　1.1材料　　健康成年SD大鼠90只（陕西省中医研究院实验动物中心提供），体质量180~240g(平均196±5)g.按体质量统一编号，然后随机等分为9组：假手术组（A组）、AEP（B组）、生理盐水治疗组（C组）、LArg75,150,300,60

4、0,1200,2400mg/kg体质量治疗组（D,E,F,G,H,I组）.蛙皮素购自美国Sigma公司,左旋精氨酸(LARG)购自上海信谊制药厂,经生理盐水稀释为25%溶液后使用,原位凋亡检测试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司).　　1.2方法　　1.2.1模型制备与用药所有实验动物术前12h禁食，自由饮水，称取体质量后，50g/L戊巴比妥（4mL/kg）肌肉注射麻醉.以腹腔内注射蛙皮素50.0μg/kg,1次/h,连续2次,制造AEP模型,假手术组注射生理盐水.4h后经颈静脉注射LArg(上海信谊制药厂批号990302，经生理盐水

5、稀释为25%溶液后使用).其后12h采取断颈方法处死动物，剖腹取材.所取胰腺组织分成两部分：一部分以40g/L甲醛固定，用于胰腺组织形态观察，并用TUNEL方法检测胰腺组织细胞凋亡；一部分制成匀浆，-20℃保存，用于测定胰腺组织ＮＯＳ活性、ＮＯ２－／ＮＯ３－浓度.　　1.2.2观察指标　　①采取相同部位的胰腺组织固定于40g/L甲醛溶液，常规方法制作病理切片，HE染色，光镜下观察.胰腺炎组胰腺组织呈炎性改变.对照组胰腺组织细胞正常.采用改良Gre.④取胰腺组织２００ｍｇ，加入ＰＢＳ缓冲液（０.０２ｍｏｌ／Ｌ，ｐＨ７.４）匀浆至２ｍL，离

6、心后取上清０.１ｍL，以酶法（南京建成生物制品研究所试剂盒），按说明书步骤测定ＮＯ２－／ＮＯ３－浓度，间接反映ＮＯ浓度.　　2.2胰腺组织中NOS活性、ＮＯ２－／ＮＯ３－浓度、腺泡细胞凋亡AP及各治疗组中组NOS活性高于正常组（P<0.05），各组间NOS活性无统计学差异（P>0.05）.B,C组ＮＯ２－／ＮＯ３－浓度明显低于A组（P<0.05），LArg治疗组ＮＯ２－／ＮＯ３－浓度，均高于正常及AP组（P<0.05），其中H,I组分别高于D,E组；AEP及各治疗组中组凋亡指数高于正常组（P<0.05），

7、其中D,E,F,G组AI高于B组，而H,I组AI低于B组（P<0.05,表2）.表2各组胰腺组织中NOS水平、ＮＯ２－／ＮＯ３－浓度、腺泡细胞凋亡指数（略）　　3讨论　　AP是普外科临床的常见急腹症之一,近年来发病率逐渐升高,临床表现凶险,常合并器官功能障碍，病死率高，目前仍属于难治性疾病之一.一般认为,胰腺炎发生后出现的炎性细胞聚集和炎性介质(即所谓“瀑布样效应”)是影响胰腺炎病情的主要因素.然而，最新的研究报告指出,胰腺炎发生时最早的病理变化出现在胰腺腺泡细胞内,腺泡细胞本身对损伤的反应是决定“瀑布样效应”程度及病情轻重的决定

8、性因素之一.AP时，胰腺细胞受损，细胞存在凋亡和坏死两种不同的死亡形式，其中腺泡细胞凋亡是机体的一种自我保护机制.AP时，受损的胰腺腺泡细胞发生死亡，如果以坏死方式进行，细胞内多种成分（多种酶原、细胞器等）