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1、重症急性胰腺炎大鼠DDFA对肺损伤细胞凋亡及Bax,Bcl史学深，方驰华，朱明德，何邹骏，陈铁军【关键词】危重病；急性病；胰腺炎；肺/损伤；细胞凋亡；DDFA【Abstract】 AIM:ToexploretheeffectsofDDFAoncellapoptosisandexpressionsofBaxandBcl2inlungtissueofratsizedinto3groups:controlgroup(n=15),SAPgroup(n=15)andDDFAgroup(n=15).ThemodelsofSAPentofmodels,serumamylase,TNFaandc
2、alciumined.Theleftlungsicroscopicobservation.CellapoptosisinlungtissueinedbyTUNELmethod.ExpressionsofBaxandBcl2munohistochemicalstainingofSABC.RESULTS:IntheSAPgroup,serumamylase,TNFa,apoptoticindex,expressionsofBaxandBcl2markedlyincreased.Lungtissueinjuriesicroscope.Asparedephase,serumamylase
3、,TNFa,apoptoticindexandexpressionsofBaxinDDFAgroupdecreasedsignificantly.inistrationintheearlystageishelpfulfordiminishinglunginjuryinducedbySAP.【Keyethasone；D：dextran；F：5Fluorouracil；A：Appotininum)治疗SAP取得明显效果.我们利用SAP肺脏损害大鼠模型，探讨细胞凋亡和Bax,Bcl2基因表达在SAP肺脏损害发病机制中的作用以及应用DDFA治疗后的影响.1材料和方法1.1材料SD大鼠45
4、只，雌雄不限，体质量200~250g，由南方医科大学实验动物中心提供；L精氨酸,分析纯级(Larginine)购自上海华美生物工程公司；血清淀粉酶测定试剂盒购自四川迈克科技有限公司；血清TNFα检测试剂盒购于北京北方生物技术研究所；细胞凋亡原位检测(TUNEL)试剂盒购自武汉博士德公司；SABC免疫组化染色法试剂盒购自武汉博士德公司.1.2方法随机分成3组：对照组(CG组),SAP组和DDFA治疗组，每组15只.每组再分为24，48和72h3个时间点，每个时间点分配5只大鼠.实验前大鼠禁食12h,自由饮水.SAP组大鼠分2次ip200g/L精氨酸溶液(2×2.5mg/g)，中间间
5、隔1h；CG组同法注射等量的生理盐水；DDFA组分别在SAP模型诱发后12，24和36h，经颈静脉注射地塞米松(2mg/kg)+低分子右旋糖酐(5mL/kg)+5氟脲嘧啶(20mg/kg)+抑肽酶(50000U/kg)；SAP组分别在同一时间点注射等量生理盐水.造模后24，48和72h等各时间点处死大鼠，心脏穿刺抽血，快速切取肺脏，测定各项指标.血清淀粉酶测定，按照说明书操作，采用放射免疫方法进行血清TNFα检测，由r计数仪直接给出有关参数、样品浓度.各组织光镜标本以多聚甲醛固定，常规石蜡包埋,HE染色，光镜观察.1.2.1肺组织细胞凋亡的测定采用DNA末端TUNEL法.切片常规
6、脱蜡入水，经30mL/LH2O2处理、蛋白酶K消化后，加入TdT和DIGUTP 4℃过夜，封闭后加生物素化抗地高辛抗体，洗涤，加SABC，DAB显色，光镜下计算肺组织内细胞凋亡指数(apoptoticandex，AI).AI计算方法：细胞核中有棕黄色颗粒者为阳性细胞，即凋亡细胞，数5个高倍视野，分别计算凋亡细胞数和总细胞数，AI=凋亡细胞数/总细胞数×100%.1.2.2肺组织Bax,Bcl2的测定采用SABC免疫组化染色法.染色模式：胞膜或胞质.根据染色强度分为：阳性(棕黄色)；弱阳性(浅黄色)；阴性(不着色).各组切片均采用图像分析系统对免疫组化染色阳性反应产物进行定量分析.
7、取切片在光学显微镜下以相同倍数（40×10）于肺组织内随机选取10个视野，利用图像分析系统分析阳性面积和阳性区域平均灰度值，并将阳性面积和平均灰度值按文献〔3〕方法换算成阳性单位(positiveunit，PU)，以PU值大小代表阳性产物表达的多少.统计学处理：采用SPSS10.0统计软件建立数据库，组间均数比较用完全随机设计资料的方差分析，两两比较用SNK法，组间方差不齐时用非参数秩和检验，细胞凋亡与肺损害的相关性用相关分析.P0.05为有显著性差异.2结果2.1肺组织病理学改
