亚油酸对培养日本沼虾肝胰腺细胞的影响

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1、第"’卷第!期河北大学学报（自然科学版）T;4#"’2;#!"$$’年!月L;FBG34;M5HCHENGEOHBIEPQ（23PFB34RAEHGAHS>EPE;G）L3G#"$$’!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!亚油酸对培养日本沼虾肝胰腺细胞的影响王宏伟!，刘瑞兰!，"，郭明申!，康现江!（!#河北大学生命科学学院，河北保定$%!$$"；"#西南师范大学生命科学学院，重庆&$$%!’）摘要：对日本沼虾肝胰腺细胞进行培养，采用(!))（*+,-.,/0）细胞培养基加质量分数为!$1

2、的胎牛血清，添加的补充成分有：23-4，235-.，(7-4，-3-4，葡萄糖，青霉素和链霉素#同时对85和渗透压6""两因子进行了研究，结果表明85%#$!%#"、渗透压为9$$／7时，细胞长势最好#以此作为培养条件，在":;4培养基中加入促细胞生长因子的亚油酸，发现其促生长作用明显，其中亚油酸浓度为!9#关键词：日本沼虾；肝胰腺细胞；细胞培养；亚油酸中图分类号：?"%&文献标识码：@文章编号：!$$$=!’9’（"$$’）$!=$$%)=$’日本沼虾（(3AB;CB3ADEF:GE88;G

3、HGIH）俗名青虾，属甲壳纲，十足目，游泳亚目，长臂虾科，是我国最主要的淡水经济虾类#近年来，病毒病已成为制约虾类养殖的关键因素之一，组织培养作为一种病理学研究的方法，其发展已成为甲壳动物病毒病研究的一个瞩目热点问题［!］#-DHG等首先报道了斑节对虾卵巢、心脏、肌肉、神经、肠道、肝胰腺和鳃等组织的体外培养［"］#胡珂等对肝胰腺、卵巢、血细胞、肌肉、上皮和心脏等组织进行了培养，将中国对虾肝胰腺组织细胞传至几十代，存活’个多月［6］#5IF等曾报道在斑节对虾的类淋巴器官组织的培养基中，加入"$:7／0的碱性纤维生长因子，使其细胞继代培养超过J$代［&］#以上都是针对海水虾，然而

4、对淡水虾类的细胞培养研究较少，尤其对日本沼虾肝胰腺的培养尚未见报道#肝胰腺具有解毒功能，但同时又是虾类最易患病的部位#本实验以日本沼虾为材料，对其肝胰腺细胞进行了体外培养，以期找到适宜的条件，为虾类细胞工程、遗传育种和生理病理等方面的研究提供参考#!材料与方法!#!材料实验所用日本沼虾购于保定府河市场，实验前暂养%>左右#!#"方法!#"#!准备工作培养基用$#""的微孔滤膜过滤除菌，所有物品均严格灭菌，实验在无菌间的超净工作台进行，操作":环境经紫外灯灭菌#!#"#"肝胰腺细胞的原代培养将日本沼虾用%’1酒精进行消毒；取出肝胰腺，用53GKI（平衡盐溶液）漂洗6次，双抗（青

5、、链霉素）洗!次，随后用53GKI再洗!次，将组织块剪成约!::6小块；取液器吹打，使细胞分散；接种于设有影响因子收稿日期："$$&=$%=!!基金项目：河北大学博士基金资助；河北大学自然科学青年项目（?"$$&$%）资助；河北省动物学重点学科资助作者简介：王宏伟（!)%$=），女，河北张家口人，河北大学讲师，博士研究生，主要从事水生生物学研究#万方数据·34·河北大学学报（自然科学版）!44:年!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!不同浓度梯度的培养基中；在!"#$%培养箱中培养；每天用

6、倒置显微镜观察细胞的生长情况，并拍照&!’&!&(肝胰腺细胞的继代培养用取液器吸干原代培养基；用)*+,-./平衡盐溶液（不含$,!0，12!0）洗’!!次，加入胰蛋白酶’!!滴消化3!’456-，后加入’!!滴培养基终止消化；用取液器吸出少许消化液，用)*+,-./漂洗，再加入少许继代培养基，用弯头滴管反复吹打制成细胞悬液，传代至另一培养板，在!"#$%培养箱中培养&!!结果!&’培养条件的优化!&’&’$,!0，12!0的加入!种培养基成分分别为培养基"：1’77、血清、葡萄糖、青霉素和链霉素&培养基#：1’77、血清、葡萄糖、青霉素、链霉素、8,$9，8,+$%(，12

7、$9!和$,$9!&倒置显微镜下观察，结果表明：加入$,!0，12!0的细胞贴壁较好，覆盖率可达7:;以上，而未加入$,!0，12!0的贴壁不牢，细胞多处半悬浮状态，不利于细胞的生长&!&’&!<+和渗透压的选择本实验对培养日本沼虾肝胰腺细胞的培养基的<+和渗透压做了以下!组实验组合&表’培养基的<+和渗透压组合"!"#$’%&’#()"*(&)+"&,-.")/&+’&*(0-12++312()*42’2/(3’组号<+渗透压／（·2>’）生长状况$5=9’?&4@4400!?&4"44000(?&4