日本沼虾及日本对虾的细胞培养

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1、河北大学硕士学位论文日本沼虾及日本对虾的细胞培养姓名：王军霞申请学位级别：硕士专业：水生生物学指导教师：王安利;王维娜2000.6.1摘要本文首次报道了日本沼虾血细胞的培养，比较了五种不同的培养基(A、B、C、D、E)，两种不同的渗透压(472mmol／Kg、750mmol／Kg)中R本沼虾原代培养血细胞的生长状况。并以碱性磷酸酶活力为测定指标。结果表明，培养基A为最适培养基，其次为B，渗透压472mrnoi／Kg较750mmol／Kg更利于细胞生长。在A培养基的基础上尝试了只本沼虾血细胞原代培养的首次传代并获得成功。基础培养基选用美国GIBCO公司的M

2、199，并添加20％胎牛血清，100单位／ml青霉素，100p．．g／ml链霉素，用5NNaCI调节渗透压为472mmol／Kg，pH值调至7．0+0．1。我们对原代和传代血细胞进行了比较，并观察了在上述培养条件下加入19／L葡萄糖，0．1mg／L维生素C对传代血细胞生长及贴壁的影响。、耐论了金属离子Cu“、Zn2+对日本沼虾传代血细胞碱性磷酸酶活性及总磷含量的影响。实验结果表明，加入适量维生素c可促进细胞贴壁，lg／L葡萄糖的加入可促进细胞生长。培养液中加入微量Cu2+可提高日本沼虾传代血细胞碱性磷酸酶的活性，当Cu“浓度为299／L时其活性有显著提高

3、(P

4、escultureofMacrobrachiumnipponensiswerereportedfirst．FivemediaandtwodifferentosmolalitieswerecomparedfortheireffectongrowthofcultureceltandtheactivityofAlkalinephosphataseinintracell．TheresultshowedthatM199(GIBCO)mediumwasthebest，M199(SERVA)wasbetter，and472mmol／Kgwasbetterthan750

5、mmo／KgforhemocytescultureofMacrobrachiumnipponensis．Usingthemethoddeveloped，studiesWerecarriedouttothefirstsubculturefromhemocytesofMacrobrachiumnipponensis．TheoptimumconditionsforshrimpcellsinM199weredeterminedtobeanosmolalityofapproximately472mmol／Kg，20％fetalbovineserum(FBS)，10

6、0U／mlpenicillin，100btglmlstrptomycin，pHrangeof6．9—7．1．Supplementstestedincluded：glucose，vitamineCandmetalions(Cu”，Zn2+)．Theresultshowedthatwithsupplementsof0．1mg／LVcand19tLglucoseinbasicmedium，thecellsattachedtothesurfaceandgrewwell．ItcanbefoundoutthatwhentheconcentrationofCu”was

7、2pg／L，theactivitiesofAKPwasthehighest，andthatconcentration，thetotalphosthotushadthehighestnumericalvalue．WhentheconcentrationofZn“was801．tg／L，notonlythetotalphosphoruswasthehighest，butalsothecellsgrewbest．WecarriedoutprimarycellculturesfrommuscleandhemocytesofPenaeusjaponicusande

8、lectronmicroscopicalobservationofhemocyt