温度与脂多糖对栉孔扇贝血细胞吞噬活力的影响.pdf

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1、第45卷第6期2015年6月中国海洋大学学报PERl0DICAL0F0CEANUNlVERslTY0FCHINA45(6)：031～038June，2015温度与脂多糖对栉孔扇贝血细胞吞噬活力的影响+徐翊轩，战文斌，邢婧”(中国海洋大学教育部海水养殖重点实验室，山东青岛266003)摘要：贝类无特异性免疫系统，细胞吞噬是其免疫防御的重要方式之一。在5、10、15、20和25℃养殖条件下，给栉孔扇贝(Chlamys屈r旭以)分别注射荧光微球、脂多糖和荧光微球混合液。在注射后的0，6，12，18，24，30，36，42和48h抽取血细胞，用荧光标记血

2、细胞以观察其对微球的吞噬状态，用流式细胞术测定血细胞对微球的吞噬率。结果表明，在5个养殖温度下，2个处理组均自6h后扇贝血细胞内即出现吞噬的微球，之后吞噬率逐渐上升，直到18～24h达到最高峰，随后逐渐下降。5、10、15、20和25℃条件下，注射荧光微球组血细胞最大吞噬率分别为8．66％±0．26％、14．00％±0．22％。16．97％±0．55％、25．62％±0．88％和8．97％±0．25％，注射脂多糖和荧光微球混合液组分别血细胞最大吞噬率为9．75％±0．48％、17．49％±0．43％、23．13％±0．57％、34．16％±0．9

3、7％和10．42％±0．45％。20℃组的两处理组血细胞吞噬率显著高于其他温度组，其次是15和10℃组，最低是5和25℃组，并且20、15℃组的最大吞噬率出现在18h，其他组均在24h。各养殖温度组中，脂多糖和荧光微球混合液组血细胞吞噬率均高于荧光微球组。研究表明：栉孔扇贝血细胞的吞噬活力受水温影响显著，脂多糖能够显著增强扇贝血细胞的吞噬活力。关键词：栉孔扇贝；血细胞；吞噬活力；温度；脂多糖中图法分类号：Q959．215文献标志码：A文章编号：1672—5174(2015)06—031-08DOI：10．16441／j．cnki．hdxb．201

4、40039贝类血细胞是其免疫防御的主要组成部分，血细胞通过吞噬、包囊、胞吐及活性氧产生等完成细胞免疫，还通过分泌和释放各种免疫因子参与体液免疫[1。2]。血细胞的吞噬作用是细胞免疫的主要方式，吞噬过程主要包括趋化作用、识别接触、内化和消化4个阶段[3]，最后清除异物。血细胞吞噬过程涉及多种因子与细胞类型，因此在某种程度上能够反应出机体生理等健康状况[4。5]。众多研究发现，环境因子[6’8]、外源刺激睁10]和病源感染等[u43]均会引起贝类血细胞吞噬活性的变化。水温是影响贝类免疫防御的重要环境因子，研究发现，过高的水温是栉孔扇贝(Chlamys

5、．知rye—ri)大规模死亡的主要原因之一[14-15]，水温的骤然改变会引起贝类血细胞吞噬率、活性氧产量及酶活性等的变化[15-17]。脂多糖是革兰氏阴性细菌外膜的组成部分，被称为固有免疫的重要激活剂之一，具有免疫调节作用[1}19]，有研究发现其在激活血细胞增殖[20

6、、活化酶原[2川、增强细胞吞噬活性[223等方面效果显著。在双壳类中，针对血细胞的吞噬作用已开展大量研究，目前多应用显微镜观察计数法、光密度法及流式细胞术研究吞噬活性[23I。直接计数法比较直观，但测定样品量有限，计算误差较大；流式细胞仪方法测定血细胞数较多，但细胞本身自发荧光

7、干扰等因素不能确定吞噬的准确性。荧光微球是高分子微球，颗粒度均一、稳定性好，应用于细胞吞噬率的检测具有荧光强度均一、易于观察、误差小等优点，在生物医学领域中示踪目标细胞、免疫标记、药物载体选择等方面应用广泛[24

8、，结合流式细胞术检测细胞吞噬率具有准确、灵敏、直观等优点。因此，采用荧光微球吞噬、流式细胞仪测定方法能够直观、准确、快速的测定血细胞的吞噬率此方法是目前优选的细胞吞噬测定方法。栉孑L扇贝是中国北方主要的养殖贝类，前期研究发现水温突变对扇贝血细胞数量的变化影响显著，甘露糖刺激能显著激活血细胞内6种内源酶的活力[13

9、。本文在此基础上研究栉

10、孔扇贝在5、10、15、20和25℃养殖水温下，分别注射荧光微球、脂多糖和荧光微球混合液，观察血细胞吞噬状态，测定血细胞吞噬率，研究水温和脂多糖对血细胞吞噬活力的影响，以期为栉孑L扇贝血细胞吞噬作用的研究提供数据。1材料与方法*基金项目：国家重点基础研究发展计划项目(2012CBll4405)；国家科技支撑计划项目(2012BADl7802)；新世纪优秀人才支持计划项目(NCET-10—0763)；教育部留学回国人员科研启动基金项目(教外司留[201111139)资助收稿日期：2014—02—20；修订日期：2014—05—05作者简介：徐翊轩(

11、1977一)，男，硕士生，主要从事贝类免疫学研究。**通讯作者：E-mail：xingjing@OUC．edu．cn中国海洋大学学报1．