多聚酶链式反应扩增DNA片段 ppt.ppt

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1、实验四PCR基因扩增实验目的通过本实验学习PCR反应的基本原理与实验技术。实验原理聚合酶链式反应(polymerasechainreaction,PCR)，是一种在体外快速扩增特定基因或DNA序列的方法，故又称为基因的体外扩增法。在待扩增的DNA片断两侧和与其两侧互补的两个寡核苷酸引物，经变性、退火和延伸若干个循环后，DNA扩增2n倍。PCR技术的原理1.变性：在加热或碱性条件下可使DNA双螺旋的氢键断裂，形成单链DNA，称之为变性。2.退火：是模板与引物的复性。引物是与模板某区序列互补的一小段DNA片段。3.延伸：从结合在特定DNA模板上的引物为出发点，将四种脱氧核苷酸以碱基配对形式按5’

2、→3’的方向沿着模板顺序合成新的DNA链。(c)(b)引物25’3’3’3’5’5’(d)新引物5’3’靶DNA的扩增(a)5’3’引物13’5’3’5’引物2互补链引物1互补链单位长度的链不同长度的链5’3’3’5’引物1互补链引物2互补链目的片段（不同长度的链未示出）聚合酶链式反应示意图(e)(f)(g)温度（℃）时间（min）94726094℃变性（1min）60℃退火（1min）72℃延伸（1.5min）循环1循环2循环3PCR反应的温度循环周期PCR反应的每一个温度循环周期都是由DNA变性、引物退火和反应延伸三个步骤完成的。图中设定的反应参数是94℃变性1min，60℃退火1min

3、，72℃延伸1.5min。如此周而复始，重复进行，直至扩增产物的数量满足实验需求为止。一般PCR反应条件实验仪器电泳仪琼脂糖凝胶电泳槽PCR仪凝胶成像系统移液器实验材料1、DNA模板2、4种dNTP3、引物1、引物24、Taq酶5、琼脂糖6、DNA相对分子质量标准物7、吸头、50ulPCR管试剂10×PCR缓冲液(含Mg2＋)4×dNTP(每种1mmol)Tag酶1U/ulDNA模板引物1:5`-GGGGAATTCATGGTGAGCAAGGGC-3`引物2:5`-GACCTGCAGGCATGCAAGCTTGGC-3`引物溶液浓度10pmol/ul实验步骤1在0.5mlRCR管内配置20ul反

4、应体系：CK(ul)1#(ul)模板01引物10.40.4引物20.40.410×PCRBuffer22Taq酶0.50.5dNTPs0.40.4ddH2O14.315.3Total2020PCR反应程序(1)94℃变性5min，(2)94℃变性1min，(3)52℃退火1min，(4)72℃延伸1min。(5)重复(2)-(4)30次（6）72℃延伸1min。实验报告要求：1、写出本实验目的、原理；2、实验器材及实验步骤；3、列出实验结果示意图并分析原因。实验结果PCR结果。1、对照(无模板)；2－6、PCR产物（5ul样品）