讲座——HPLC故障排除.pdf

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1、1页HPLC色谱柱故障排除杭州苏州无锡2003年3月24日~28日免费服务电话:800-820-3278AgilentTechnologies2003-MarchZorbax色谱柱2页HPLC系统组件所有组件均会发生问题，*泵都需要进行故障排除！*进样器/自动进样器*色谱柱*检测器*数据系统/积分仪免费服务电话:800-820-3278AgilentTechnologies2003-MarchZorbax色谱柱3页HPLC色谱柱故障症状A.色谱柱柱压B.色谱峰峰形免费服务电话:800-820-3278AgilentTechnologies2003-M

2、archZorbax色谱柱4页A.色谱柱柱压1.清洗色谱柱柱压过高查原因，矫正柱压---清除色谱柱污染物和堵塞的柱填料---大分子量/色谱柱吸附物*陶瓷片堵塞---样品或缓冲液沉淀*色谱柱污染2.反冲色谱柱*色谱柱填料堵塞---清洗堵塞的陶瓷片3.更换陶瓷片检查有/无色谱柱时系统的压力---柱压问题有时由系统或预柱堵塞引起免费服务电话:800-820-3278AgilentTechnologies2003-MarchZorbax色谱柱5页A.色谱柱柱压冲洗色谱柱---用比流动相更强的溶剂反相色谱柱用以下溶剂至少各25mL冲洗色谱柱(分析柱)•不含缓冲

3、盐的流动相正相色谱柱•100%甲醇•100%乙腈用以下溶剂至少各50mL冲洗色谱柱(分析柱)•75%乙腈+25%异丙醇•50%甲醇+50%三氯甲烷•100%异丙醇•100%乙酸乙酯•100%二氯甲烷*•100%己烷**若使用己烷或二氯甲烷冲洗色谱柱，则在重新使用反相流动相以前，必须用异丙醇冲洗色谱柱!!!免费服务电话:800-820-3278AgilentTechnologies2003-MarchZorbax色谱柱6页A.色谱柱柱压耐压隔垫色谱柱入口陶瓷片1.戴手套2.防止柱床干涸3.不要用身体接触柱体体温会使柱填料膨胀，溢出色谱柱4.不要拧得过紧

4、柱体柱接头更换陶瓷片柱接头免费服务电话:800-820-3278AgilentTechnologies2003-MarchZorbax色谱柱7页A.色谱柱柱压预防柱压过高*采取色谱柱保护措施保护柱在线过滤器*样品制备*适当适时冲洗色谱柱*含缓冲盐的流动相一定要过滤*保持更换缓冲液和水免费服务电话:800-820-3278AgilentTechnologies2003-MarchZorbax色谱柱8页A.色谱柱柱压预柱过滤器保护柱流动相进样器样品制备样品分析色谱柱•化学溶剂•去除颗粒/聚合物预柱作用于流动相过滤样品保护柱，在线过滤器作用于样品离心分离检

5、测器•固相萃取(SPE)免费服务电话:800-820-3278AgilentTechnologies2003-MarchZorbax色谱柱9页HPLC色谱柱故障症状A.色谱柱柱压B.色谱峰峰形免费服务电话:800-820-3278AgilentTechnologies2003-MarchZorbax色谱柱10页B.色谱峰峰形*裂分峰*色谱峰拖尾*色谱峰峰扩展色谱柱“二次作用“*柱效低色谱柱死体积色谱柱污染色谱柱寿命色谱柱容量柱外效应许多色谱峰峰形问题都是复合型问题---色谱峰扩展和拖尾或拖尾随保留加剧免费服务电话:800-820-3278Agilen

6、tTechnologies2003-MarchZorbax色谱柱11页B.色谱峰峰形裂分峰*色谱柱污染复杂样品基体或待测样品量大*颗粒物堵塞陶瓷片复杂样品基体或待测样品量大*色谱柱死体积流动相pH>7时，硅胶溶解(除非使用特殊色谱柱)*样品溶剂效应样品溶剂强于流动相-裂分峰和扩展峰取决于样品量免费服务电话:800-820-3278AgilentTechnologies2003-MarchZorbax色谱柱12页B.色谱峰峰形裂分峰---色谱柱污染一次进样后30次进样后一次进样后用100%ACN冲洗色谱柱再次进样22241141433305101505

7、1015Time(min)051015Time(min)Time(min)色谱柱:StableBondSB-C8，4.6x150mm,5mm样品:过滤后的OTC感冒药流动相:60%25mMNaHPO,pH3.0:40%MeOH24流速:1.0mL/min温度:35°C1.假麻黄碱2.APAP检测器:UV254nm3.未知4.扑尔敏免费服务电话:800-820-3278AgilentTechnologies2003-MarchZorbax色谱柱13页B.色谱峰峰形裂分峰---样品溶剂色谱柱:StableBondSB-C8,4.6x150mm,5mm流动

8、相:82%H2O:18%ACN1进样量:30mLA.样品溶剂B.样品溶剂100%乙腈流动相OCH32OH2H