3_hplc_问题与故障排除

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1、HPLC问题与故障排除©2011WatersCorporation1故障排除的步骤V发现问题V定位问题V纠正问题V防止问题的再发生©2011WatersCorporation2目录°色谱问题潜在的来源°性能监测—反压—谱带展宽°色谱问题故障排除—峰形问题—保留时间问题—额外的峰—基线问题©2011WatersCorporation3色谱问题的可能根源°流动相°泵°进样器°保护柱°在线过滤器°连接管线及接头°色谱柱°积分仪/记录仪/软件°检测器°样品合理的逻辑判断－将会节省解决问题的时间©2011WatersCorporation4故障排除的策略°

2、简化问题－°评估对试验室效率的影响－°观察色谱图－°尝试分类问题－°最先对最容易的部分进行故障排除化学问题机械问题°色谱柱°泵°谱带展宽°保护柱°进样器°连接管路°流动相°检测器°色谱柱°样品/样品瓶问题°数据采集°样品瓶©2011WatersCorporation5性能监测°反压°谱带展宽©2011WatersCorporation6性能监测-反压°反压太高?—除去色谱柱，压力是否正常？—更换/冲洗色谱柱—从系统的末段，系统地除去管路/模块，压力是否正常？—更换管路/维修模块°反压太低/压力波动？—流速正确否？—泵内有空气==》流动相脱气—检查

3、渗漏©2011WatersCorporation7系统监测-反压©2011WatersCorporation8溶剂粘度©2011WatersCorporation9谱带展宽°怎样在优异的分离度下得到良好的峰形?怎样得到好的分离以及尖锐的峰形？°好的峰形谱带–好的分离°(良好的机械和化学性能)检测池Watersc1998©2011WatersCorporation10性能监测°设置一个标准物质和一组参考的参数—比如测柱效°使用样品优化试验，定义一系列的条件—使用与生产商一样的测试条件—使用自己的方法©2011WatersCorporation11性

4、能监测°使用与生产商一致的测试—优点—结果可比较—缺点—只能检查色谱柱的柱效，保留与不对称因子—需要特定的色谱柱流动相与测试化合物°使用自己的方法—监测至少一个峰—特定峰对的理论塔板数（N），不对称因子（As），保留因子（k），选择性（α）©2011WatersCorporation12性能监测°柱外谱带展宽效应—进样体积—进样器—管路连接—进样器到色谱柱—色谱柱到检测器—螺丝和锥箍—检测器体积©2011WatersCorporation13柱外谱带展宽°观察到的谱带展宽σtot—是所有对谱带展宽效应有贡献的因素之总和—色谱柱—柱外σEC仪器组件

5、©2011WatersCorporation14测量系统的谱带展宽°测定步骤—从系统中取下色谱柱—将进样器与检测器直接连接—流速1.0ml/min—检测器灵敏度050.5-10AUFS1.0AUFS—检测器时间常数0.2s或者更小—将柱效测定样品用流动相稀释10倍，进样量2ul©2011WatersCorporation15测定谱带展宽使用5sigma法测量峰高4.4%处的峰宽：谱带展宽（µL）=1000×峰宽（PW，seconds）/60°典型的LC系统的谱带展宽应该在100ul±20ul°微柱系统应<25ul©2011WatersCorpor

6、ation16系统谱带展宽对柱效的影响°相同的色谱柱AB12,0007,000仪器A：仪器B：谱带展宽较小（70µL）谱带展宽较大（120µL）测出的塔板数较高（1200012,000）测出的塔板数较低（8,000）©2011WatersCorporation17柱外展宽效应.009".020".040"°注意连接管路的不同内径©2011WatersCorporation18连接管路在系统谱带展宽上的影响°注意:较长的管路制造了更多的谱带展宽.009".020".040"样品谱带在管路内部扩散©2011WatersCorporation19色谱柱

7、安装及连接的机械因素°连接适当°连接接不妥，造成°连接漏液不妥谱带展宽°由于色谱柱连接不当引起的谱带展宽，机械问题©2011WatersCorporation20色谱柱安装及连接的机械因素©2011WatersCorporation21不恰当安装的影响额外的谱带扩展体积©2011WatersCorporation22故障排除中常见的问题°良好的色谱图°差的色谱图°注意：峰高变低，峰展宽，峰拖尾，尤其是最后后一个峰©2011WatersCorporation23色谱问题故障排除°峰形问题°保留问题°额外的峰°基线问题©2011WatersCorpo

8、ration24峰形问题°在线过滤器/保护柱污染°色谱柱受损°次级相互作用°色谱柱超载°质量超载—体积超载—其他的柱外效应°采样速率—检