药物分析辅导：hplc故障及排除方法

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1、药物分析辅导：HPLC故障及排除方法(一)保留时间变化1.柱温变化：柱恒温；2.等度与梯度间未能充分平衡：至少用10倍柱体积的流动相平衡柱3.缓冲液容量不够：用>25mmol/L的缓冲液4.柱污染：每天冲洗柱5.柱内条件变化：稳定进样条件,调节流动相6.柱快达到寿命：采用保护柱(二)保留时间缩短1.流速增加：检查泵,重新设定流速2.样品超载：降低样品量3.键合相流失：流动相PH值保持在3~7.5检查柱的方向4.流动相组成变化：防止流动相蒸发或沉淀5.温度增加：柱恒温(三)保留时间延长1.流速下降：管路泄漏,更换泵

2、密封圈,排除泵内气泡2.硅胶柱上活性点变化：用流动相改性剂,如加三乙胺,或采用碱至钝化柱3.键合相流失：同前(二)34.流动相组成变化：同前(二)45.温度降低：同前(二)5(四)出现肩峰或分叉1.样品体积过大：用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的15%2.样品溶剂过强：采用较弱的样品溶剂3.柱塌陷或形成短路通道：更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件4.柱内烧结不锈钢失效：更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品5.进样器损坏：更换进样器转子(五)鬼峰1.进样阀残余峰：每次用后用强溶剂清洗阀,改进阀和样品的清洗2.样品中未知

3、物：处理样品3.柱未平衡：重新平衡柱,用流动相作样品溶剂(尤其是离子对色谱)4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽谱)：每天新配,用抗氧化剂5.水污染(反相)：通过变化平衡时间检查水质量，用HPLC级的水(六)基线噪声1.气泡(尖锐峰)：流动相脱气,加柱后背压2.污染(随机噪声)：清洗柱,净化样品,用HPLC级试剂3.检测器灯连续噪声：更换氘灯4.电干扰(偶然噪声)：采用稳压电源,检查干扰的(如水浴等)5.检测器中有气泡：流动相脱气,加柱后背压(七)峰拖尾1.柱超载：降低样品量,增加柱直径采用较高容量的固定相2.峰干扰：清洁样

4、品,调整流动相3.硅羟基作用：加三乙胺,用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相PH值,钝化样品4.同前(四)4：同前(四)45.同前(四)3：同前(四)36.死体积或柱外体积过大：连接点降至最低,对所有连接点作合适调整,尽可能采用细内径的连接管7.柱效下降：用较低腐蚀条件,更换柱,采用保护柱(八)峰展宽1.进样体积过大：同(四)12.在进样阀中造成峰扩展：进样前后排出气泡以降低扩散3.数据系统采样速率太慢：设定速率应是每峰大于10点4.检测器时间常数过大：设定时间常数为感兴趣第一峰半宽的10%5.流动相粘度过高：增

5、加柱温,采用低粘度流动相6.检测池体积过大：用小体积池,卸下热交换器7.保留时间过长：等度洗脱时增加溶剂含量也可用梯度洗脱8.柱外体积过大：将连接管径和连接管长度降至最小9.样品过载：进小浓度小体积样品