纸层析法分离鉴定氨基酸实验的改进.pdf

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1、纸层析法分离鉴定氨基酸实验的改进陈倩1刘晶2张璐1(1西北大学现代学院，陕西西安7101302西安外事学院，陕西西安710077)ImprovementofSeparationandIdentificationofAminoAcidsbyPaperChromatographyChenQian，LiuJing，ZhangLu(ModemCollegeofNorthwestUniversity，Xi’an710130，ChinaXi’anInternationalUniversity，Xi’an710077，China)摘要：纸层析法分离鉴定氨基酸是制药

2、工程专业本科必修实验课，文献实验方法存在实验时间过长、溶剂毒性大等缺点。通过实验对展开剂进行选择，得出展开剂的最佳配比，并在此条件下对赖氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、亮氨酸和脯氨酸等进行了分离和鉴定，取得了较好的分离结果。该方法与文献相比，简化操作步骤，节约仪器试剂，节省实验时间，使用毒性较小的溶剂，符合绿色化学的要求。关键词：纸层析法；氨基酸；比移值；绿色实验Abstract：Thepaperchromatographyseparationofaminoac—idsisacompulsorybiologicalexperimentforundergrad

3、uatemajorinpharmaceuticalengineering．Butsomeshortcomings，suchasalongduration，toxicityofthesolvent，existinthisexperiment．ThisStUdyconductedtheinfluencefactors，obtainedthebestratiooftheexpansionagent．Weisolatedandidentifiedlysine，phenylal-anine，glycine，leucineandprolineunderthisc

4、ondition．Icshowedabetterseparationeffect．Comparedwiththemethodinliterature，theimprovedpaperchromatographyhastheadvantageofmoresimplesteps，lessagentdoseandinstrument，shorterseparatetime，moreobviousseparateeffect，lesstoxicsolvents，whichconformstOthegreenchemistryrequest．Keywords：

5、Paperchromatography；Aminoacid；RfValue；Greenexperiment1仪器与试剂仪器：定性滤纸，点样毛细管，电吹风，500mL烧杯，培养皿，镊子。试剂：各种试剂均为分析纯。氨基酸标准溶液：称取氨基酸250mg溶于50mL0．01toolL。1的HCl溶液中氨基酸混合样品液：各量取2mL的赖氨酸溶液，苯丙氨酸溶液，甘氨酸溶液，脯氨酸溶液和亮氨酸溶液，于小烧杯中充分混合均匀。扩展剂：95％乙醇：水=7：3(V：V)，称取茚三酮200mg溶于200mL按比例配置好的乙醇水溶液中。茚三酮可溶于乙醇和水，因此直接将茚三酮溶

6、解在展层剂中，扩展剂沿滤纸向上移动，茚三酮也随之向上移动，层析结束后，溶剂前沿以下的部分均匀分布着扩展剂和茚三酮，氨基酸则因分配系数的不同而在纸上分离，加热后在氨基酸所在位置即可显出色斑。2实验步骤(1)点样：取滤纸(定性滤纸裁成7．2xllem)1张，距一端2cm处用铅笔轻轻的划线，然后在线上分别用0．5％赖氨酸、0．5％苯丙氨酸、0．5％甘氨酸、0．5％亮氨酸溶液、0．5％脯氨酸溶液及氨基酸混合样品溶液均匀点样，每点点2-3次，每次点样完成后用吹风机冷风吹干，每点在纸上扩散的直径最大不超过5mmo(2)展层：烧杯中加入配好的展层剂厚度约1．5cm

7、(体积约50mL)，将点好样的滤纸竖直放入，点样端朝下，展层时问2h。(3)烘干、显色：展层结束后，取出滤纸，用铅笔标记溶剂前沿，电吹风热风吹干约2-3min。待各斑点显色后，用铅笔轻轻描出斑点轮廓。(4)标记斑点中心，用直尺测量斑点中心至点样线间的距离及溶剂前沿至点样线问的距离。计算各点比移值。2017年04月犯l哲理I25图1纸层析结果3结果和讨论3．1结果分析(见图1)1．O．5％赖氨酸溶液2．0．5％苯丙氨酸溶液3．0．5％甘氨酸溶液4．0．5％亮氨酸溶液5．0．5％脯氨酸溶液6．氨基酸混合液说明：该图为实验后隔天拍摄，斑点轮廓已扩散。赖氨酸

8、跗。=1．017．1=0．14(文献[1]值：0．03)苯丙氨酸Rf2=4．717．1=0．66(文献[1]