试验二细菌的染色和细菌细胞构造的观察.ppt

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1、微生物学实验海南大学海洋学院实验一细菌的形态和结构观察一、实验目的观察细菌的菌落特征掌握简单染色法和细菌涂片方法在油镜下观察细菌个体的形态特征形态观察主要包括群体的形态和个体的形态观察。细菌的基本形态主要分为球菌、杆菌、螺旋菌三大类，近年还发现星状和四方形细菌等。细菌形态受培养时间、培养基成分、浓度、培养温度、培养时间等发生变化。细菌菌落大多表面光滑湿润，有光泽，一般菌落较小，质地颜色均匀，同培养基结合不紧密。菌落特征与组成菌落的细胞结构、生长状况、排列方式、好气性和运动性直接相关。细菌个体微小，较透明，必须染色方可呈现。根据细菌

2、个体形态观察的不同要求，可将染色分为3种类型：简单染色、鉴别染色、特殊染色。二、实验的基本原理二、实验的基本原理简单染色法原理：细菌在中性的环境中带负电荷，用碱性染料（解离时带正电荷）如美兰、结晶紫等进行染色。采用加热或化学固定两种方法，使菌体粘附于玻片上，并且增加菌体对染料的亲和力三、实验材料显微镜（显微镜灯）、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸等。0.05%和0.1%吕氏碱性美蓝染色液，0.5%番红染液，中性红染液，二甲苯，生理盐水细菌三种形态的染色标本。大肠杆菌，金黄色葡萄球菌，哈氏弧菌和无乳链球菌24h液体培养基培养物盖玻片、

3、凹玻片、接种环、酒精灯。简单染色法（一般染色法）１.菌种：牙垢细菌２.涂片３.干燥：自然气干或酒精灯高处微微加热。４固定５.染色：在整个涂面上滴加齐氏石炭酸复红，染色１分钟。６.水洗：倾去染液，用自来水细流冲洗至流下的水中无染料颜色为止。７干燥：空气中自然干燥。８镜检：在油镜下观察牙垢中的各种细菌形态并绘图。四、实验步骤四、实验步骤油镜的使用1.用前检查：零件是否齐全，镜头是否清洁。2.调节光亮度3.低倍镜观察：粗调、细调4.依次再进行中倍、高倍观察5.油镜观察：高倍镜下找到清晰的物象后，提升聚光镜，在标本中央滴一滴香柏油，使油镜

4、镜头浸入香柏油中，细调至看清物象为止。6.换片：另换新片，必须从第三条开始操作。7.用后复原：观察完毕，上悬镜筒，先用擦镜纸擦去镜头上的油，然后再用擦镜纸沾取少量二甲苯擦去残留的油，最后用擦镜纸擦去残留的二甲苯，后将镜体全部复原。显微镜保养和使用中的注意事项：1.不准擅自拆卸显微镜的任何部件,以免损坏。2.镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证光洁度3.观察标本时，必须依次用低、中、高倍镜，最后用油镜。当目视接目镜时，特别在使用油镜时，切不可使用粗调节器，以免压碎玻片或损伤镜面。4.观察时，两眼睁开，养成两眼能够轮换观察的习

5、惯，以免眼睛疲劳，并且能够在左眼观察时，右眼注视绘图。5.拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，不可单手拿，更不可倾斜拿。6.显微镜应存放在阴凉干燥处，以免镜片滋生霉菌而腐蚀镜片。四、实验步骤细菌三种基本形态的观察：菌落形态观察和个体形态观察，这里主要指个体形态的观察。1.结合油镜的使用，观察三张细菌染色片（球状菌、杆状菌、和螺旋状菌），边观察边绘图。2.看示范镜：观察双球菌、四联球菌，并绘图。四、实验步骤思考题油镜与普通物镜在使用方法上有何不同？应特别注意些什么？使用油镜时，为什么必须用镜头油？镜检标本时，为什么先用低倍镜观

6、察，而不是直接用高倍镜或油镜观察？实验二细菌的革兰氏染色一、实验目的掌握细菌的革兰氏染色进一步熟练掌握显微镜油镜的使用技术观察和识别细菌细胞的特殊构造细菌细胞壁的结构和组成存在差异，因此不同细菌对革兰氏染色有不同的反应（阳性和阴性）：革兰氏阴性菌的细胞壁中含有较多脂类，肽聚糖层较薄、交联度低，当以95%酒精脱色时，脂类被溶解除去，使得细胞壁空隙变大，肽聚糖因95%酒精处理，其孔径会缩小，但由于肽聚糖含量较少，细胞壁孔径缩小有限，使得结晶紫与碘形成的紫色染料复合物被95%酒精洗脱出细胞壁之外，并被随后的红色复染剂染成红色；革兰氏阳性

7、菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，脂类含量少，经95%酒精脱色处理后，肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，使得结晶紫与碘形成的紫色染料复合物很难被95%酒精洗脱出细胞壁之外，因此细菌仍保留初染时的颜色，呈现紫色。二、实验的基本原理显微镜，酒精灯，载玻片，接种环，香柏油，二甲苯，双层瓶，擦镜纸，生理盐水，吸水纸，染色缸等。染色剂：草酸铵结晶紫染色液，卢（路）哥氏(Lugol)碘液，95%乙醇，0.5%番红染色液。菌种：哈氏弧菌和鳗弧菌24h普通海水琼脂斜面28℃培养物，金黄色葡萄球菌和芽孢杆菌24h牛肉膏琼脂斜面28℃培养物。三、实验材料

8、革兰氏（Gram）染色法1.涂片2.初染：在做好的涂面上滴加草酸铵结晶紫染液，染1分钟，倾去染液，流水冲洗至无紫色。3.媒染：先用新配的路哥氏碘液冲去残水，而后用其覆盖涂面1分钟，后水洗。4.脱色：除去残水后，滴加95%酒精进行脱色约30秒，后立即