实验二 细菌的染色和细菌细胞构造的观察 课件

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1、Exercisenine厌氧微生物的培养制作者：黄海婵（hhc@zjut.edu.cn）Tel:0571-88320921or0571-88320057实验内容目的要求实验原理实验材料方法步骤思考题目的要求学习厌氧微生物的培养方法掌握斜面接种技术实验原理培养设备：包括接种室、恒温培养室、恒温培养箱、液体发酵——摇床、厌氧培养罐等。好氧培养：例如平板培养、斜面培养、浅层液体培养、液体振荡培养或通气搅拌培养等都属于好氧培养的方法。厌氧培养：除了最简便的深层液体培养以外，可以采用物理、化学或生物学的方法来排除培养容器中的空气或空气中的氧气，创

2、造厌氧条件。对于严格厌氧的微生物，要用化学和物理并用的方法。厌氧培养罐（图－9），以某种气体取代培养容器中空气，并添加还原剂，如产气袋法和换气法。在进行厌氧培养时，可以用指示剂检查系统中的还原条件，一般实验室中常用的如葡萄糖——美兰指示剂。实验原理——厌氧罐培养法美兰氧化还原指示剂：0.006NNaOH;0.015%美兰溶液;6％葡萄糖溶液;上列三种溶液在使用时等量混合，加热使美兰退色，迅速放入厌氧罐中。反应式：Mg＋ZnCl2＋2H2O→MgCl2＋Zn（OH）2＋H2↑C6H8O7＋3NaHCO3→Na3(C6H5O7)+3H2O+

3、3CO2↑2H2+O2→2H2O实验材料菌种：大肠（E.coli）斜面；枯草芽孢杆菌斜面；丙丁菌斜面；培养基：牛肉膏蛋白胨斜面培养基；丙丁斜面培养基其它：厌氧罐，催化剂，产气袋，酒精灯，记号笔等。实验程序1.斜面接种（大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、丙丁菌）；2.将已活化的催化剂装入厌氧罐罐盖下，旋紧；4.剪开气体发生袋的一角，将其置于厌氧罐内，3.将0.006NNaOH溶液、0.015%美兰溶液和6％葡萄糖溶液各取1ml等量混合，加热使美兰退色，迅速放入厌氧罐中；同时向产气袋中加入10ml水；3.将接种的菌种分别标记，两人一组，其中一人放置在

4、37℃培养箱中直接培养，另外一人将菌种放置厌氧罐内；5.迅速盖好厌氧罐罐盖，将固定梁旋紧，置37℃培养箱中培养，观察并记录罐内情况变化及菌种生长情况。斜面接种技术拿：左手平托两支试管，拇指按住试管底部。外侧使是菌种试管，内侧是待接的空白斜面。（两支试管的斜面同时向上），右手将棉塞旋松，以便在接种时容易拔出。接种环消毒：右手拿接种环，在火焰上先将环端烧红灭菌，然后将有可能伸入试管的其余部位也过火灭菌。拔塞：将两支试管的上端并齐，靠近火焰，用右手小指和掌心将两支试管的棉塞一并夹住拔出，棉塞仍夹在手中，然后让试管口缓缓过火焰。冷却、划线：将已

5、灼烧过的接种环伸入外侧的菌种试管内。先冷却，而后再用环沾取一定量的菌苔，将沾有菌苔的接种环抽出试管。迅速将沾有菌种的接种环伸入另一支待接斜面试管的底部，轻轻向上划线（直线或曲线）。塞：接好种的斜面试管口再次过火焰，棉塞底部过火焰后立即塞入试管内。灭菌：将沾有菌苔的接种环在火焰上烧红灭菌。先在内焰中烧灼，使其干燥后，再在外焰中烧红，以免菌苔骤热，使菌体爆溅，造成污染。标记：放下环后，再将棉塞旋紧，在试管斜面上距试管口2～3cm处贴上标签。培养：28～370C恒温培养。录像演示思　考　题简单染色法中各步骤的注意事项是什么？要得到正确的革兰氏

6、染色结果必须注意哪些操作？关键在哪几步？为什么？实验九结束下周实验实验十病源微生物学检查（书中实验六十七、六十八及实验室提供的讲义，可上网下载）Web：ftp：//210.32.200.206.22/下次实验请同学们自带实验材料（具体由指导教师安排）