实验二 细菌的染色和细菌细胞构造的观察 课件_1

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1、Exercisetwo细菌的革兰氏染色和芽孢染色制作者：黄海婵（hhc@zjut.edu.cn）Tel:0571-88320921or0571-88320057实验内容目的要求实验原理实验材料实验程序思考题革兰氏染色原理芽孢染色原理革兰氏染色芽孢染色目的要求学习微生物涂片掌握细菌的革兰氏染色和芽孢染色进一步熟练掌握显微镜油镜的使用技术观察和识别细菌细胞的特殊构造实验原理——革兰氏染色原理G﹢菌：细胞壁厚，肽聚糖网状分子形成一种透性障，当乙醇脱色时，肽聚糖脱水而孔障缩小，故保留结晶紫-碘复合物在细胞膜上。呈紫色。Gˉ菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，其脂含量高,乙醇将脂

2、溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，沙黄复染后呈红色。一般，有芽胞的杆菌和绝大多数和球菌，以及所有的放线菌和真菌都呈革兰氏正反应；弧菌，螺旋体和大多数致病性的无芽胞杆菌都呈现负反应。实验原理——芽孢染色原理芽孢染色法的基本原理，用着色力强的染色剂孔雀绿或石炭酸复红，在加热条件下染色，使染料不仅进入菌体也可进入芽孢内，进入菌体的染料经水洗后被脱色，而芽孢一经着色难以被水洗脱，当用对比度大的复染剂染色后，芽孢仍保留初染剂的颜色，而菌体和芽孢囊被染成复染剂的颜色，使芽孢和菌体更易于区分。实验材料涂片染色用的细菌培养物１.大肠杆菌（Escherichiacoli)24h的斜面培养物。２

3、.枯草杆菌（Bacillussubtilis)12—16h的斜面培养物。染色剂吕氏碱性美蓝染液(或草酸铵结晶紫染液)，石炭酸复红染液，结晶紫染色液、卢戈氏碘液、95%乙醇、石炭酸复红液。其它材料显微镜、载玻片、接种环、镊子、酒精灯、各种染色液、火柴、无菌牙签、玻璃铅笔、蒸馏水、香柏油、擦镜纸、吸水纸、乙醇乙醚溶液等实验程序Ⅰ（革兰氏染色的方法和步骤）涂片蒸馏水接种环草酸铵结晶紫碘液95%乙醇自然干燥媒染1min脱色20~30s初染1min、后水洗固定沙黄复染2min干燥镜检水洗时不要直接冲菌膜水洗水洗水洗每位学生一人一组，取大肠杆菌和金黄色葡萄球菌，做一块混合涂片，进行革兰氏染色。录

4、像演示革兰氏染色法的观察GramstainofmixedculturePresenceofbothgram(+)purplecocciandgram(-)pinkrods.革兰氏染色的注意事项革兰氏染色成败与否与许多因素有关菌龄：要用活跃生长期的幼培养物作革兰氏染色涂片厚薄：菌苔在生理盐水中涂片要均匀，局部不宜过厚,以免脱色不完全造成假阳性。脱色时间（最为关键）1.注意练习无菌操作；2.在载玻片上滴半滴生理盐水；3.取菌不要贪多，接种环上肉眼可见菌苔痕迹即可另外实验程序Ⅱ（芽孢染色的方法和步骤）美兰复染2min干燥镜检孔雀绿蒸馏水涂片接种环自然干燥固定保持冒蒸汽5min水洗不要直接冲

5、菌膜每位学生一人一组，取枯草芽孢杆菌，进行芽孢染色。录像演示枯草芽孢杆菌的观察实验报告根据观察结果，画出大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的形态图，并注明菌体染色后的颜色，说明是G+还是G-。思　考　题简单染色法中各步骤的注意事项是什么？要得到正确的革兰氏染色结果必须注意哪些操作？关键在哪几步？为什么？实验二结束请值日生留下，打扫卫生下周实验实验三放线菌的形态观察和霉菌的湿室培养（书中实验十一和实验十四）