巯基功能化磁性微球的构建及其对蛋白质的亲和分离.pdf

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1、2015年9月化学研究534第26卷第5期CHEMICALRESEARCHhttp：／／hxya．cbpt．cnki．net巯基功能化磁性微球的构建及其对蛋白质的亲和分离刘珊珊，邹雪艳，郭静玉，刘锦，陈丹云(1．河南大学化学化工学院，河南开封475004；2．河南大学特种功能材料重点实验室，河南开封475004)摘要：通过水热法一步合成了纳米Fe。0微球，并在甲苯中用巯基丙基三甲氧基硅烷(MPS)对其进行表面修饰得到了Fe。0SH微球，通过DTNB法测得微球表面巯基含量为333．54g／mg．该纳米微球可以吸附溶液中的N，从而形成Fe。0—SH—Ni复合材

2、料．以此复合材料为载体，可以将以组氨酸为标签的(Histagged)融合蛋白直接从细胞裂解液中进行提纯，并在外加磁场的作用下实现对目标蛋白的快速分离，其对His—taggedTRX蛋白的分离能力为20．6／~g／mg，特别适合于对以组氨酸为标签蛋白的分离纯化．关键词：四氧化三铁；巯基；组氨酸；蛋白质分离；亲和中图分类号：061文献标志码：A文章编号：1008—1011(2O15)05—0534—06Constructionofthiol—functionalmagneticmicrospheresandaffinityseparationofprotein

3、IIUShanshan，Z0UXueyan，GUOJingyu，L1UJin，CHENDanyun(1．CollegeofChemistryandChemicalEngineering，HenanUniversity，Kaifeng475004，Henan，China2．KeyLaboratoryforSpecialFunctionalMaterials，HenanUniversity，Kaireng475004，Henan，China)Abstract：Ferriferrousoxidemagneticmicrospheres(MSs)wereprepa

4、redviasolvothermalroute．TheSO—obtainedMSsweremodifiedby(3-mereapto—propy1)trimethoxysilane(MPS)inmythylbenzenetogivebirthoftheferriferrousoxidewiththiolgroup(Fe304一SH)micro—spheres，whichcanabsorbNitoformFe3O4一SH—Ni．TheamountofthiolgroupofFe3O4一SHwastestedtobe333．54／,g／mgbymeansofD

5、TNBmethod．AfterchelatingNiions，Fe3SH—NiMSswereusedtoenrichandpurifyhistidine—tagged(His—tagged)proteinsdirectlyfromthemixtureoflysedceilswithoutpretreatment．Moreover，thepreparedMSscansepa—ratethetargetproteinquicklyinthemagneticfield．IthasbeenfoundthatFe3O4一SH—Ni。MSspresentnegligi

6、blenonspecificproteinadsorptionandhighproteinbindingactivitywiththesat—urationcapacitybeing2O．6／~g／mgandtheyareespeciallysuitableforrapidpurificationofHis—taggedproteins．Keywords：Fe304；thiolgroup；His—tagged；proteinseparation；affinity蛋白质的分离纯化，特别是微量蛋白的纯化，在淀、透析、超过滤和层析等，处理工艺比较复杂、费时蛋白组

7、学领域是一个重要课题．传统的蛋白质且成本较高．随着生物学的发展，蛋白质可以带上的分离纯化通常对目标蛋白都具有较高的选择某一标签进行表达，从而使蛋白质可以通过此标签性，然而这些方法都需要采用多步处理，如沉被特异性的分离纯化]．在这些亲和标签中，以六聚组氨酸为标签的(His—tagged)蛋白使用最为广泛．收稿日期：2015一l一24．这些His—tagged蛋白很容易通过微生物细胞进行基金项目：国家自然科学基金(21271062)，河南省教育厅科学技术重表达，从而使这些标签蛋白在其体内大量产生．点研究项目(14B150003)．作者简介：刘珊珊(1991一)

8、，女，硕士生，研究方向为复合纳米材料在这些His—tagged的蛋