含羧基中药成分荧光标记方法的建立及优化.pdf

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1、第24卷第7期化学研究与应用Vo1．24．No．72012年7月ChemicalResearchandApplicationJuly，2012文章编号：1004—1656(2012)07—1030-06含羧基中药成分荧光标记方法的建立及优化刘春叶，苗延青，卫引茂，杨转转(1．西安医学院药学院，陕西西安710021；2．西北大学化学与材料科学学院，陕西西安710069)摘要：用荧光标记技术对含羧基类中药成分进行标记，探索中药成分荧光标记方法，提高其检测灵敏度、为中药药代动力学研究奠定基础。以荧光试剂8一氨基芘一1，3，6-三磺酸三钠盐(AtrPS)和绿原酸组

2、成研究体系，对标记条件进行优化。反应体系中加入1一乙基一3-(3一二甲氨丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC·HC1)与N一羟基丁二酰亚胺(NHS)可使衍生反应在室温下进行。APTS标记绿原酸的较优反应条件为：绿原酸与APTS的浓度比为1：5，EDC的浓度为5mmol／L，NHS的浓度为0．33mmolfL。以0．1mol／L、pH5．50的NaH2PO4-N％HPO4为缓冲溶液，绿原酸首先与EDC、NHS避光反应4h，再与APTS反应4h，即可达到较好的标记效果。此标记方法操作简便，灵敏度高，可以用于含羧基类中药成分的荧光标记研究。关键词：荧光衍生试剂；荧光强度

3、；绿原酸中图分类号：0657．3文献标识码：AEstablishandoptimizationoffluorescentlabelingofcarboxylfractionsinChinesemedicineLIUChun．yeJ，MIAOYan—qing，WEIYin．mao，YANGZhuan—zhuan(1．SchoolofPharmacy，Xi’anMedicalUniversity，Xi’an710021，China；2．CollegeofChemistry&MaterialsScience，NorthwestUniversity，Xi’an71

4、0069，China)Abstract：labelingofcarboxylfractionsisimportanttotheresearchoftraditionalChinesemedicine．ItcanimprovethedetectionsensitivityandperfectthepharmacokinetiesstudyingofChinesemedicine．Thelabelingmethodanditsevaluationsystemarepre—sentedinthispaper．Inthework，trisodium8-aminop

5、yrene一1，3，6-trisulfonate(APTS)andchlorogenicacid(CGA)werechosentofor—malabelingsystem．IfEDCandNHSexist，thelabelingreactioncantakeplaceatroomtemperature．ExperimentalresuhsshowthatthepreferbufersystemwasNaH2PO4-N％HPO4(0．1mol／L，pH5．50)．CGAreactedwithEDCandNHSinabovebuferfor4hatloomte

6、mperature．TheconcentrationofEDCandNHSwas5mmo1／Land0．33mmo1／L，respectively．Then，APTS(concentrationratioofCGAandAPTSwas1：5Wasaddedtoabovereactionsystemsandcontinuereactedfor4h．ConclusionsThelablingmethodisnotonlysimplebutalsosensitive，andcanbepossiblyusedinstudyofcarboxylfractionofC

7、hinesemedieinelabeling．Keywords：fluorescencereagent；fluorescenceintensity；chlorogenicacid中药作为我国的国粹，其药用价值受到越来学、毒性等方面的研究却十分有限，成为中药走向越多的关注。然而，关于中药的药效成分、药理国际市场的重要障碍。上述研究的瓶颈在于中药收稿日期：2011-09-08；修回日期：2011．11—11基金项目：陕西省教育厅基金项目(09JK709)资助；中国博十后基金项目(20100481356)资助；西安医学院校基金项目(2009FZ01)资助联系人简

8、介：刘春叶(1977一)，女，副教授，博士，主要研究药物分子的分离