双色荧光标记筛选中药心肌保护物质方法研究

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1、⑧万方数据论文作者签名：终函妇指导教师签名：型翌论文评阅人1：昊丞逛∑熬援∑逝江太堂评阅人2：至壹羞∑副熬拯∑逝江太堂评阅人3：麽丝忠∑塾援3浙江王些太堂评阅人4：评阅人5：答辩委员会主席：委员1：委员2：委员3：委员4：委员5：万方数据浙江大学研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得堂望盘堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所

2、做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：繇N翮蛾签字日期：为f眸弓月77日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解逝望盘堂有权保留并向国家有关部门或机构送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权堂婆太堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：朗嘲埔导师签名：可翟卜．；签字日期：wf眸弓月≥1日签字日期：Ⅵf睁；月弓?日万方数据浙江大学硕士学

3、位论文致谢本论文受“重大新药创制”国家科技重大专项课题“现代中药新药发现和评价技术平台建设”(No．2012ZX09304—007)资助，谨此感谢!首先，由衷地感谢我的导师——王毅副教授，感谢王老师在我攻读硕士学位过程中对我所付出的一切心血。学业上的悉心指导，生活上的关怀备至都让我铭记于心。王老师扎实渊博的学术功底，严谨求实的科研作风，勤勉敬业的工作态度和不断创新的科研精神都是我今后工作和学习的楷模。感谢老师帮助我开拓研究思路，精心点拨，热忱鼓励，不厌其烦地纠正我工作中出现的错误，循循善诱地教导、培养我发现问题、

4、分析问题、解决问题的能力。王老师与我们亦师亦友的相处方式，开朗的个性和宽容的态度都令我终生受益。感谢药信所的全体老师。感谢程翼宇教授、瞿海斌教授、范骁辉教授、赵筱萍教授、王书芳副研究员、张玉峰副研究员、邵青老师、葛志伟老师、潘坚扬老师在研究生期间给予的悉心指导和热情帮助。感谢林明宝、王迎超、肖舜、杨振中、李翔、金烨成师兄以及龚婉、呙敏、王程、董敏媛师姐的帮助和照顾。感谢同窗陈锥、蒋维，兰小红以及师弟师妹黄怡、陶珊、陈雅琪等对我科研工作的帮助和生活上的陪伴，与你们一起度过的每个日子我都终生难忘。此外，我还要特别感谢

5、我的父母和家人对我的无私付出以及无微不至的关怀，感谢他们对我的理解和支持，他们是我前进道路上的坚实后盾以及强大动力。最后，再次真诚地感谢所有帮助、支持、批评和鼓励我的人们。孙丽娟2014年1月于浙大启真湖畔万方数据浙江大学硕士学位论文资助资金本论文受“重大新药创制”国家科技重大专项课题“现代中药新药发现和评价技术平台建设”∽o．2012ZX09304-007)资助，谨此感谢!万方数据浙江大学硕士学位论文摘要双色荧光标记筛选中药心肌保护物质方法研究专业：药学硕士研究生：孙丽娟导师：王毅副教授摘要随着现代生物技术的蓬

6、勃发展，以细胞模型为基础的高通量、高内涵筛选技术在药物研发领域得到了广泛应用，也为中药药效物质的发现提供了新的研究思路与技术手段。阿霉素(Doxorubicin，DOX)是临床上常用的广谱抗肿瘤药物之一，被广泛地应用于实体瘤、白血病、淋巴瘤、乳腺癌等肿瘤治疗。但阿霉素会产生累积性、剂量依赖性的心肌毒性，并进一步发展成不可逆性心肌损伤，最终导致充血性心力衰竭，因此严重地抑制了其临床应用。阿霉素诱导心肌毒性的机制至今仍未完全阐明，现主要认为阿霉素诱发心肌毒性是多因素共同的作用结果，主要包括自由基损伤、细胞凋亡、线粒体

7、损伤、钙离子超载、能量代谢改变等。本文采用细胞荧光显微图像技术和细胞显微图像自动获取与分析平台，建立了基于双色荧光标记的抗阿霉素心肌细胞毒性的活性物质筛选方法，进行了一系列初步探索。主要研究成果如下：1．根据阿霉素损伤心肌细胞的机制选取了三种荧光染料进行研究，其中荧光染料FDA用于标示细胞整体活力，Hoechst用于标记细胞核，MitoTrackerRed(MTR)用于标记线粒体膜电位。在离体培养H9c2心肌细胞模型上，分别考察了三种荧光染料标记细胞时荧光强度与细胞密度的线性关系，以及不同浓度阿霉素损伤后荧光强度

8、变化规律。结果表明，FDA和Hoechst标记细胞时有较好表现(线性关系R2>0．9)，而MTR不适用。2．采用FDA和Hoechst两种荧光染料标记H9c2心肌细胞，考察单色荧光染料标记和双色荧光标记下阿霉素损伤心肌细胞的量效关系，结果表明FDA和I¨万方数据浙江大学硕士学位论文摘要Hoechst双色荧光标记时两种荧光染料彼此间无显著干扰。在此基础上，用阳性药芦丁对该方