放射性核素标记技术.ppt

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1、放射性核素标记技术实验核医学一.几个概念1.标记及标记化合物：通过一定的实验手段将某种放射性同位素和某种生物活性化合物相连接，使之成为某示踪物的方法称之为标记。其产物称之为标记化合物。2.内源性标记：在有机或生物合成过程中，使放射性前身物掺入到某生物活性分子一级结构内的标记方法。特点是标记化合物和生物活性物质理化特性完全相同.3.理想标记：当化合物中某原子被相同元素的放射性同位素所取代，而取代后的分子性质不发生改变(如构型,旋光性等)这称之为理想标记。它和内源性标记特点相似但方法不同。4.非理想标记：在一定条件下，用组成化合物以外的放射性同位素原子进行取代该化合物的某些原子的

2、标记称之非理想标记。其分子结构或性质均较原化合物有不同程度的改变。5.末端标记：用化学或酶的方法将放射性同位素连接在完整生物活性分子上的方法。6.双标记：在某生物活性分子中引进二种元素同位素原子或同一元素的二种放射性同位素标记称之为双标记。如T3，T4分别用125I，131I标记观察脱碘情况。22Na，24Na在细胞内外示踪观察Na流动情况。优点：是在同一实验中可以观察多种指标及代谢变化，排除减少个体实验误差。7.标记化合物的术语及符号1)定位标记：以"S"表示,标记分子中标记的原子局限于分子的指定位置.用以追踪分子中某原子的去向。A-X-B+C-X*-D---------A

3、-X-D+C-X*-BA-X-B+C-X*-D---------A-X*-D+C-X-B产物C-X*-B1式正确.2)非定位标记：标记分子中标记的原子没有特定的位置。3)均匀标记：以"U"表示,指标记放射性原子在标记物分子中的分布，相对于分子中所有碳原子而言具有统计学均一性.如U-14C葡萄糖。4)全标记：以"G"表示,通常指在氚标记的分子中所有的氢原子位置均被氚所取代，它和均匀标记的区别是：前者指"C"而后者指氚,前者仅表示统计学的均一性,而后者则是完全或随机取代.如G-3H-胆固醇。5)准定位标记：以"N"表示,氚原子在预期标记的位置上的分布低于化合物总氚含量的95%。8

4、.标记位置及命名如1-14C-醋酸←标记化合物↑↖标记位置核素二.放射性同位素的选择根据实验选择相应的同位素，应注意：1.比放射性:表示单位重量的元素或示踪所含的放射性多少,以mCi/mmol或MBq/mmol等单位表示。由于放射性同位素的比放射性相差悬殊，所以当某示踪中引进相同原子数目的不同种类的放射性同位素，则单位时间内的核衰变数就有上千，上万倍的差异，可见选用高比放射性的同位素进行标记有着重要意义。2.丰度：类似于纯度的概念，代表了某示踪物中具有放射性部分的比例。丰度的高低直接或间接地影响标记产物的比放射性。3.半衰期：半衰期对标记反应的影响首先是对比放射性的影响,其次

5、是要根据实验目的和时间而选择不同半衰期的放射性同位素。4.稳定性和外辐射:标记用的放射性同位素应有较好的稳定性，如131I较125I稳定性差，而且有β辐射，所以RIA分析常选用125I标记。5.探测仪器的计数效率:氚标记物需要用液闪测量不仅样品制备烦琐，而且仪器计数效率低，致使其应用受限。6.标记类型同位素交换法、化学合成法、生物合成法、三.关于被标记的生物活性物的选择:被标记的生物活性物是根据实验所确定的，但用于标记的物质必须是高纯度，所谓高纯度包括两个含义：1.化学纯2.其中所含的微量杂质不干扰实验内容，就放免而言纯品应有足够的免疫纯；杂蛋白的掺入可因其被大量标记而使标记

6、失去意义；类似结构的杂质可因和反应体系内某些物质交叉而干扰实验。四．标记化合物的主要指标及检查方法1.核纯度：所需放射性活度核纯度%=×100样品总放射性活度半衰期测定法、能量测定、2.放化纯度：特定形态的放射性活度放化纯度%=×100样品总放射性活度层析法、放射自显影、放射性扫描、HPLC、分段切取测量待测组分和原点的距离（I）Rf=流动相的前沿和原点的距离（L）3)比活度：比活度=放射性活度/单位化学量*每一种放射性核素都有一个比活度的理论值比活度λN=0.693N/T1/2N为一毫克原子（mA）的总原子数为6.023×1020=69.6×108/T1/2GBq/mA意义

7、是每mA的某核素比活度的理论值，即每分子接上一个该放射性核素原子的标记化合物的比活度理论值。一些常用放射性核素比活度理论值核素半衰期Bq/mmol14C5730Y2.3G3H12.33Y1073G35S87.4d55.2T32p14.28d338.5T125I60.2d80.3T131I8.04d600T五.标记方法原料为简单化合物如3H2,Ba14CO3,Na125I等1)同位素交换法2)化学合成法3)生物合成法多肽或蛋白质的碘化标记125I-Na在氧化剂的作用下氧化成碘分子,与蛋白质或多肽分子中的酪