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1、分子标记技术分子标记的概念广义的分子标记(molecularmarker)是指可遗传的并可检测的DNA序列或蛋白质。狭义的分子标记概念只是指DNA标记，是能反映生物个体或者种群间基因组中某种差异特征的DNA片段，它直接反映基因组DNA间的差异。分子标记的特点（1）直接以DNA的形式表现，在生物体的各个组织、各个发育阶段均可检测到，不受季节、环境限制，不存在表达与否等问题；（2）数量极多，遍布整个基因组，可检测座位几乎无限；（3）多态性高，自然界存在许多等位变异，无须人为创造；（4）表现为中性，不影响目标
2、性状的表达；（5）许多标记表现为共显性的特点，能区别纯合体和杂合体。分子标记类型①基于杂交的分子标记，如RFLP②基于DNA序列和芯片的分子标记，SNP③基于PCR的分子标记，如RAPD、SSR、ISSR等分子标记的应用1、遗传图谱构建2、基因定位研究3、在物种亲缘关系和系统分类中的应用4、分子标记辅助育种王老师近年发表关于分子标记的文章1、LuJJ，WangS，ZhaoHY，LiuJJ，WangHZ*，GeneticlinkagemapofEST-SSRandSRAPmarkersintheendan
3、geredChineseendemicherbDendrobium(Orchidaceae)，JournalofPlantResearch，2012(Revised)(SCI)2、LuJJ,ZhaoHY,SuoNN,WangS,ShenB,WangHZ*,LiuJJ,2012,GeneticlinkagemapsofDendrobiumnobileandD.moniliformebasedonEST-SSR,SRAP,ISSRandRAPDmarkers,ScientiaHorticulturae,13
4、7:1-10(SCI)3、XueDW,FengSG,ZhaoHY,JiangH,ShenB,ShiNN,LuJJ,LiuJJ,WangHZ*.2010,ThelinkagemapsofDendrobiumspeciesbasedonRAPDandSRAPmarkers,JournalofGeneticsandGenomics.37(3):197-204（SCI）4、WangHZ*,WuZX,LuJJ,ShiNN,ZhaoY,ZhangZT,LiuJJ.2009,Moleculardiversityand
5、relationshipsamongCymbidiumgoeringiicultivarsbasedoninter-simplesequencerepeat(ISSR)markers.Genetica,136(3):391–399（SCI）RAPD分子标记技术S43引物对14种兰属植物扩增结果一、实验原理RAPD(randomlyamplifiledpolymorphicDNA,随机扩增的多态性DNA)建立于PCR基础上，它是利用一系列(通常数百个)不同的随机排列碱基顺序的寡聚核苷酸单链(通常为十聚体)
6、为引物，对所研究基因组DNA进行PCR扩增,聚丙烯酰胺或琼脂糖电泳分离检测扩增产物DNA片段的多态性，这些扩增产物DNA片段的多态性反应了基因组相应区域的DNA多态性。RAPD标记特点1、引物随机，无需专门设计。2、PCR引物没有种属限制。3、最初的反应中退货温度较低，一般为36℃。4、操作技术简便。5、DNA样品需要较少，成本较低。6、显性遗传，不能鉴别杂合子与纯合子。7、某些情况下实验结果重复性较低。二、实验试剂植物基因组DNA、随机引物（10mer）、Tap酶、10×PCR缓冲液（含Mg2+）、d
7、NTP、ddH2O三、操作步骤（1）在20μl反应体系中，加入10×PCR缓冲液2μldNTP0.8μl随机引物1μlTap酶1.2μl模板DNA1μlddH2O14μl（2）PCR反应程序：94℃2min94℃1min36℃1min40个循环72℃1min72℃10min，4℃保存。（3）取PCR产物10μl加3μl上样缓冲液(6×)于2%琼脂糖胶上电泳。（4）电泳结束，观察、拍照。ISSR分子标记技术ISSR引物U807对两种铁皮石斛的扩增结果ISSR引物U826对两种铁皮石斛的扩增结果实验原理IS
8、SR(inter-simplesequencerepeat)即简单序列重复间区是在微卫星技术基础上发展起来的一种新的分子标记。其基本原理是:真核生物广泛存在简单重复序列（simplesequencerepeat，SSR），如（AT）n（GAC）n等。利用SSR设计引物，并在引物的的3‘端或5’端加上2-4个随机核甘酸，以保证引物与基因组DNA中SSR的3‘端或5’端结合，在PCR反应中，锚定引物可引起特定位点退火，用来检测两个SSR之间的一
